Иммуноферментный метод оценки активности системы гемостаза у больных в остром периоде инфаркта миокарда

Полный текст

Согласно современным представлениям, внутрисосудистое свертывание крови занимает доминирующее значение в патогенезе инфаркта миокарда [3, 7, 9]. Развитие синдрома ДВС у больных острым инфарктом миокарда связано с поступлением значительного количества прокоагулянтного материала в кровяное русло, что приводит к расстройству в системе гемостаза с образованием микротромбов в артериолах, капиллярах и венулах различных органов с нарушением или без нарушения их функции. Одновременно активируется фибринолитическая система, что сопровождается расщеплением фибрина и фибриногена и появлением в связи с этим в крови продуктов их деградации (ПДФ). Присутствие в кровотоке денатурированного белка, обломков инфарцированного миокарда ведет к возрастанию фагоцитарной активности клеток ретикуло-эндотелиальной системы. Частицы же, подлежащие фагоцитозу, распознаются благодаря наличию на их поверхности маркеров-опсонинов, одним из которых является, фибронектин [6]. Кроме того, фибронектин, обладая антитромботическими свойствами, повышает растворимость фибрин-мономера и служит медиатором клиренса патологических продуктов коагуляции [11]. Процесс рассеянного внутрисосудистого свертывания крови продолжается до тех пор, пока не нормализуется коагуляционный механизм и из крови не будут удалены избыточные количества ПДФ и клеточного детрита из зоны инфаркта миокарда [5, 9, 10].

Клиническая диагностика синдрома ДВС зачастую трудна, так как формирование признаков заболевания обусловлено не только им. В случае отсутствия критических ситуаций, при которых ДВС определяет значительную часть клинических симптомов, она может быть даже и невозможной. Решающее значение в таких случаях имеет лабораторная диагностика. Наиболее трудны в лабораторной диагностике синдрома ДВС случаи клинически гладкого течения заболевания, при котором количество тромбоцитов и их функциональная активность, а также концентрация и активность плазменных факторов свертывания крови не уменьшены в связи с адекватным воспроизводством последних [4], а при суперкомпенсированных формах ДВС даже заметно увеличены.

Специфическим признаком, который наблюдается при всех формах синдрома ДВС является микроангиопатическая гемолитическая анемия. Сущность ее заключается в отложении в микроциркуляторном русле проточных нитей фибрина, которые повреждают строму эритроцитов, ускоряя их разрушение, что приводит к насыщению плазмы свободным гемоглобином [4, 9].

Следовательно, различные формы синдрома ДВС можно определять при наличии , повышенного содержания ПДФ и свободногогемоглобина в крови больных острым инфарктом миокарда, а изменения содержания в ней фибронектина отразят интенсивность клиренса патологических продуктов коагуляции и клеточного распада из зоны миокарда [5, 6, 10, 11].

Существует ряд методов для определения ПДФ, содержания фибронектина и свободного гемоглобина в крови [1]. Однако они либо громоздки и дают большое расхождение результатов, либо, обладая достаточной точностью (например, радиоиммунологический метод), имеют высокую стоимость регистрирующей аппаратуры и нуждаются в специальных условиях для их применения.

Более приемлемы для массовых, серийных определений ПДФ, уровня фибронектина и свободного гемоглобина в крови иммуноферментные методы, отличающиеся простотой исполнения, точностью и невысокой стоимостью аппаратуры.

Задачей нашей работы являлось изучение Содержания ПДФ, фибронектина и свободного гемоглобина в крови здоровых и больных острым инфарктом миокарда разработанным иммуноферментным методом (твердофазная сэндвич-модификация для количественного определения данных показателей) и оценка активности системы гемостаза у больных с неосложненным острым инфарктом миокарда.

Учитывая данные ряда авторов [2, 8, 9] о кратковременности пиков гиперкоагуляции у больных острым инфарктом миокарда в ранние сроки заболевания, мы сочли необходимым испытать иммуноферментный метод в определении ПДФ, фибронектина и свободного гемоглобина в крови в течение первых 3 сут от начала болезни. Исследования были проведены в Донецком мединституте.

Контрольную группу составили 12 здоровых мужчин в возрасте от 21 до 29 лет. С целью повышения значимости результатов, полученных иммуноферментным методом, в исследуемую группу подбирали больных с верифицированным диагнозом острого инфаркта миокарда и с гладким, неосложненным течением в условиях лечения без применения антикоагулянтов.

Диагноз острого инфаркта миокарда ставили согласно критериям ВОЗ (1970) по результатам повторного клинического, электрокардиографического и лабораторного исследования. Было обследовано 25 больных (14 мужчин и 11 женщин) в возрасте от 42 до 77 лет. Инфаркт миокарда был крупноочаговым (нижней локализации — у 7, передней — у 10) и трансмуральным передним (у 8).

Кровь у больных, поступавших через 2— 5 ч от начала сильного ангинозного приступа, исследовали в динамике через каждые 3 ч в течение первых 3 сут. Концентрация свободного гемоглобина и фибронектина в плазме здоровых лиц составила соответственно 34,7±0,2 и 323±43,2 мкг/мл, а содержание ПДФ в сыворотке крови — 20,1± 6,0 мкг/мл.

Содержание фибронектина у больных острым инфарктом миокарда к 5 ч от начала сильного ангинозного приступа снижалось, достигая к 9 часам наблюдения наименьших значений — 128,1 ± 11,2 мкг/мл, (Р<0,01), что было почти в 3 раза ниже нормы, а уровень ПДФ и свободного гемоглобина в крови к этому сроку увеличивался в 2—3 раза — соответственно 74,3± 3,7 (Р<0,01)и 66,3 ±2,1 мкг/мл (Р<0,01).

При сопоставлении взаимосвязи между содержанием в крови ПДФ и фибронектина, свободного гемоглобина и фибронектина определена четкая отрицательная корреляция (r= — 0,78; Р< 0,05 и r= —0,82; Р< 0,05 соответственно). К 18 ч исследования концентрация фибронектина возросла до 253,2± 34,5 мкг/мл (Р<С 0,02) и к 75 ч приблизилась к нормальным значениям.

Концентрация свободного гемоглобина и ПДФ в крови больных острым инфарктом миокарда в последующие 3-часовые интервалы наблюдения медленно нарастала и к 33— 36 ч резко поднялась до 308,82± 23,1 мкг/мл (Р< 0,03) и 310,0± 16,9 мкг/мл (Р< 0,02), что в 9—15 раз превышало уровень здоровых лиц. Таким образом, максимальному росту содержания ПДФ и свободного гемоглобина плазмы, зарегистрированному через 33—36 ч от начала заболевания, предшествовало наибольшее падение уровня фибронектина в крови к 9 ч заболевания. Высокая напряженность гемокоагуляционного потенциала (по уровню ПДФ и свободного гемоглобина) держалась до 42—45 ч исследования и к исходу 48—51 ч эти показатели в крови снизились соответственно до 64,5+2,8 мкг/мл (Р<0,01) и 163,5+ 14,3 мкг/мл (Р<0,02), но не нормализовались к окончанию периода наблюдения. При оценке взаимосвязи между уровнями первого и второго показателей в крови больных выявлена четкая прямая корреляция (r = +0,83; Р< 0,05).

Итак, в системе гемостаза у больных крупноочаговым и трансмуральным инфарктом миокарда при гладком неосложненном течении выявляется синдром ДВС по динамическому (в часах) изменению показателей ПДФ, свободного гемоглобина и фибронектина, определяемых серийно иммуноферг ментным методом. Впервые нами установлено, что увеличение содержания ПДФ и свободного гемоглобина в крови больных острым инфарктом миокарда идет параллельно и сопровождается одновременным достоверным снижением уровня фибронектина. Кроме того, показано, что снижение содержания фибронектина почти на сутки предопределяет максимальное напряжение гемокоагуляционного потенциала и может служить маркером для оперативного прогнозирования развития синдрома ДВС.

ВЫВОДЫ

1. Иммуноферментный метод позволяет определять содержание продуктов деградации фибрина/фибриногена, фибронектина и свободного гемоглобина в крови здоровых и больных острым инфарктом миокарда.
2. У больных крупноочаговым и трансмуральным острым инфарктом миокарда с гладким неосложненным течением содержание продуктов деградации фибрина/фибриногена и свободного гемоглобина в крови повышается одновременно выше нормы почти в 3 раза к 9 ч от начала сильного ангинозного приступа, а максимум их увеличения (соответственно в 15—16 и 9 раз) отмечается через 36—42 ч от момента заболевания. Затем их уровень к 51 ч наблюдения значительно снижается, однако к исходу 3 сут не нормализуется.
3. Уровень фибронектина в крови больных острым инфарктом миокарда с гладким, неосложненным течением спускается ниже нормы почти в 3 раза к 9 ч от начала заболевания, затем к 18 ч исследования возрастает и к нормальным значениям приближается лишь к 75 ч наблюдения.
4. Динамическое (в часах) совместное определение продуктов деградации фибрина/фибриногена, свободного гемоглобина и фибронектина в крови больных с гладким, неосложненным течением заболевания позволяет выявлять синдром ДВС, а значительное снижение концентрации фибронектина при этом указывает на начало рассеянного внутрисосудистого свертывания крови и предопределяет почти за сутки максимальное напряжение гемокоагуляционного потенциала (наибольшие значения продуктов деградации фибрина/фибриногена и свободного гемоглобина).
5. Простота исполнения, высокая точность, доступность регистрирующей аппаратуры позволяет рекомендовать иммуноферментные тест-системы на продукты деградации фибрина/фибриногена, свободный гемоглобин и фибронектин в крови для прогнозирования, диагностики и лечебного контроля состояния системы гемостаза при развитии синдрома ДВС у больных острым инфарктом миокарда.

Об авторах

А. В. Соловьев

Институт экспериментальной кардиологии ВКНЦ АМН СССР

Автор, ответственный за переписку.
Email: info@eco-vector.com
Россия, Москва

Г. А. Ермолин

Институт экспериментальной кардиологии ВКНЦ АМН СССР

Email: info@eco-vector.com
Россия, Москва

М. М. Диков

Институт экспериментальной кардиологии ВКНЦ АМН СССР

Email: info@eco-vector.com
Россия, Москва

Г. А. Игнашенкова

Институт экспериментальной кардиологии ВКНЦ АМН СССР

Email: info@eco-vector.com
Россия, Москва

E. Е. Ефремов

Институт экспериментальной кардиологии ВКНЦ АМН СССР

Email: info@eco-vector.com
Россия, Москва

Список литературы

Дополнительные файлы