Functional status of neutrophils and monocytes in rheumatoid arthritis

Full Text

Фагоциты как эффекторное звено патологических иммунных реакций при ревматоидном артрите, взаимодействуя с иммунными комплексами, выбрасывают в окружающую среду лизосомные ферменты и кислородные радикалы, которые разрушают синовиальную оболочку и хрящи сустава, что придает тканям аутоантигенные свойства [2, 3, 11]. Вместе с тем нейтрофилы и моноциты фагоцируют иммунные комплексы и продукты разрушения тканей, способствуя удалению их из организма. Можно предположить, что при внесуставных проявлениях ревматоидного артрита, когда указанные процессы развиваются в других органах, фагоциты крови будут более активными, чем при изолированном суставном синдроме [1].

Функциональное состояние нейтрофилов и моноцитов изучали с помощью теста восстановления в нерастворимый диформазан нитросинего тетразолия (HCT-тест), отражающего генерацию в клетке оксидантов при активации гексозомонофосфатного шунта [2, 4].

HCT-реакцию нейтрофилов и моноцитов капиллярной крови исследовали у 17 больных и 24 здоровых доноров. Больные были в возрасте от 19 до 72 лет с продолжительностью заболевания от года до 29 лет на разных стадиях развития процесса в фазе обострения. Диагноз ставили в соответствии с критериями Американской ревматологической ассоциации [3]. Больные были разделены на две группы. В 1-ю вошли 11 человек, у которых наряду с суставным синдромом имелись внесуставные проявления ревматоидного артрита. У 6 больных была субфебрильная лихорадка, которая у одного из них сочеталась с анемией (Нb — 1,7 ммоль/л), у 2 — с анемией и амиотрофическим синдромом (с потерей массы тела более 5 кг в период обострения). У одной больной лихорадка возникла на фоне анемии и поражения ревматоидными узелками легких, которые появились при обострении заболевания и подверглись обратному развитию в процессе лечения. У 4 больных отмечалась ревматоидная нефропатия, в одном случае протекавшая с амиотрофическим синдромом и потерей массы тела. У одной больной были обнаружены синдром Рейно и ревматоидные узелки в области межфаланговых суставов кистей. 2-ю группу составили 6 больных с изолированным суставным синдромом.

У всех пациентов процесс оказался серонегативным при определении ревматоидного фактора с помощью латекс-теста. Не обнаружилось различий между группами в продолжительности болезни, в стадиях развития, хотя у больных 1-й группы активность заболевания была выше: у 6— II степени, у 4— III, у одного — I. Во 2-й группе активность I степени была у 3 больных, II — также у 3.

HCT-тест ставили по методу Парка и соавт. [14] в модификации с использованием раствора гепарина (100 ед./мл) для промывания микропипеток и лунок планшета. Применяли также вариант метода, в котором вместо гепарина в качестве антикоагулянта добавляли к крови 0,1 М раствор цитрата натрия в соотношении 9:1 по объему. Результаты исследований выражали в процентном соотношении клеток (моноцитов и нейтрофилов) с 0, I, II, III степенями активности. Полученные данные обрабатывали методами вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента.

Как видно из табл. 1, достоверных различий в соотношениях числа активных и неактивных нейтрофилов у больных ревматоидным артритом и у доноров не обнаружено. Нет изменений и в соотношении числа неактивных и общего количества активных нейтрофилов у больных с внесуставными проявлениями, но степень активности у них была выше. Отмечается разница в количестве нейтрофилов со II (Р<0,02) и III (Р<0,05) степенями активности по сравнению с контролем. HCT-реакция нейтрофилов у больных с изолированным суставным синдромом не отличается от контрольной.

Более существенно при ревматоидном артрите изменяется функциональное состояние моноцитов. Достоверно возрастает доля клеток с активностью всех трех степеней, а общее количество активных моноцитов увеличивается более чем в 2 раза. Однако при разделении больных на группы стало ясно, что доля НСТ-положительных моноцитов возрастает только при внесуставных проявлениях заболевания, в то время как у больных с изолированным суставным синдромом соотношение числа неактивных и активных клеток совпадает с контрольным.

Можно предположить, что активация фагоцитов (как нейтрофилов, так и моноцитов) в органах происходит в русле микроциркуляции, в котором развертываются названные выше патологические реакции [1, 8, 9]. По всей видимости, нейтрофилы, будучи кратковременно живущими клетками, в основном погибают, а активированные моноциты возвращаются в общий кровоток и обнаруживаются при исследовании. Активация клеток может возникать при взаимодействии с циркулирующими в крови и фиксированными в тканях иммунными комплексами, содержание которых у больных с внесуставными проявлениями ревматоидного артрита повышено [15, 16].

Гепарин, используемый при постановке HCT-теста по стандартному методу, является неспецифическим стимулятором фагоцитов [12]. При ревматоидном артрите, по данным некоторых авторов, отмечается колебание уровня гликозаминогликанов, в том числе гепарина, в крови [6, 13]. Поэтому у 5 больных и 7 доноров был поставлен HCT-тест параллельно двумя упомянутыми методами. По стандартному методу раствором гепарина 100 ед./мл промывали микропипетки для взятия крови и лунки планшета, в которых шла реакция, затем гепарин удаляли. Таким образом, доза гепарина, участвовавшего в реакции, была небольшой и ее явно не хватало для стимуляции нейтрофилов. Соотношения числа клеток при постановке HCT-теста по двум методам у доноров не отличались друг от друга (табл. 2). Не было также достоверных различий в активности нейтрофилов у больных и в контроле.

Вместе с тем на ту же дозу гепарина моноциты здоровых и больных реагировали увеличением доли клеток с активностью 1 степени (Р<0,0001 в обоих случаях), но при этом количество моноцитов с активностью I степени возрастало у больных в 15,5 раза, а у здоровых — только в 2,4 раза. Кроме того, у больных наблюдалось увеличение доли клеток с активностью II степени (Р<0,05); у здоровых увеличение содержания моноцитов с активностью II степени было статистически недостоверным.

При постановке HCT-теста с гепарином у больных ревматоидным артритом по сравнению с донорами возрастало число активных моноцитов преимущественно за счет доли клеток с активностью 1 степени (Р<0,0001 ). В то же время при постановке теста с цитратом натрия результаты были аналогичны контрольным.

Таким образом, по данным HCT-теста функциональное состояние нейтрофилов капиллярной крови у больных ревматоидным артритом существенно не отличается от нормального как при изолированном суставном синдроме, так и при внесуставных проявлениях заболевания. Достоверно возрастает лишь доля клеток с активностью II и III степеней при контакте нейтрофилов с гепарином у больных с внесуставными проявлениями. При ревматоидном артрите с внесуставными проявлениями обнаруживается повышение функциональной активности моноцитов капиллярной крови при контакте клеток in vitro с малыми дозами гепарина при оценке с помощью HCT-теста. Можно утверждать, что повышение активности моноцитов в HCT-тесте с гепарином при ревматоидном артрите, обнаруживаемое сравнительно простым и безвредным для больного методом, может свидетельствовать о висцерализации процесса.

About the authors

M. I. Arleevskaya

Lenin Kazan Institute for Advanced Medical Education; Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Kazan

O. D. Zinkevich

Lenin Kazan Institute for Advanced Medical Education; Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Kazan

I. E. Voronina

Lenin Kazan Institute for Advanced Medical Education; Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Kazan

References

Supplementary files