Immunologic tests in the diagnosis of candidiasis sensitization

Full Text

В настоящее время в Казанском НИИЭМ разработан аллерген Candida albicans для диагностики аллергических заболеваний, обусловленных сенсибилизацией к грибам рода Candida, с помощью кожно-аллергических проб (КАП) [2]. Однако в ряде случаев только по результатам КАП невозможно судить о наличии грибковой сенсибилизации. Имеются заболевания, при которых постановка кожных проб противопоказана [6]. Необходима разработка тестов in vitro, обеспечивающих полную безвредность специфической диагностики для больного.

К доступным и информативным методам выявления сенсибилизации относятся следующие тесты: реакция дегрануляции базофилов (РДБ), реакция ингибирования миграции лейкоцитов человека (РИМЛ), показатель повреждения нейтрофилов (ППН) [5]. Каждый из них характеризует один из типов аллергической реакции. Так, по реакции дегрануляции базофилов человека оценивается I тип аллергической реакции — реакция аллергена со специфическим IgE на поверхности базофила с последующим выходом содержимого гранул из клетки. Реакция ингибирования миграции лейкоцитов позволяет судить о IV типе аллергической реакции. Тест основан на взаимодействии аллергена со специфическими Т-лимфоцитами, выделении ими лимфокинов, в том числе фактора, ингибирующего миграцию нейтрофилов, и воздействии этого фактора непосредственно на клетки-мишени (нейтрофилы), что проявляется уменьшением миграционного пути полинуклеаров. Тест ППН несет информацию о гиперчувствительности как немедленного, так и замедленного типов [6].

Цель настоящей работы заключалась в оценке, возможности использования экспериментально-производственных партий аллергена Candida albicans в тестах in vitro для характеристики кандидозной сенсибилизации.

Было обследовано 10 здоровых доноров крови без клинических признаков кандидозной сенсибилизации и 30 больных аллергодерматозами (хроническая рецидивирующая крапивница, нейродермит, аллергический дерматит, экзема) с предполагаемой грибковой сенсибилизацией. Клинический диагноз основывали на данных объективного обследования, кожных проб и иммунологических тестов. Кожно-аллергические пробы . (КАП) с аллергеном Candida albicans в концентрации 5 мкг/мл (20 PNV) были поставлены 24 больным. Иммунологическое лабораторное обследование включало три специфических теста (РДБ, РИМЛ, ППН) с аллергеном Candida albicans, направленных на выявление грибковой сенсибилизации.

РДБ ставили в модификации Н. В. Сардыко [3]. РИМЛ проводили по методике А. Г. Артемовой [1] в пятиканальных капиллярах Э. П. Трошанова [4], тест ППН — по методике В. А. Фрадкина [5] . В качестве антигена в этих реакциях применяли аллерген из дрожжеподобного гриба Candida albicans в следующих концентрациях: 120, 60, 30, 15, 8 мкг/мл. Использовали 3 партии аллергена.

У 10 здоровых доноров без клинических признаков грибковой сенсибилизации одновременно изучали тесты РДБ, РИМЛ, ППН с различными концентрациями аллергена. Разведения 120, 60, 30 и 15 мкг/мл давали 70—100% положительных реакций. Значения показателей реакций с дозой 8 мкг/мл были повышенными у 30—40% доноров, то есть примерно соответствовали проценту положительных реакций ЛАП у здоровых лиц (табл. 1), а с использованием высоких концентраций препарата были достоверно выше результатов тестов с малым содержанием аллергена (8 мкг/мл).

У больных аллергодерматозами с предполагаемой грибковой сенсибилизацией средние значения показателей РДБ, РИМЛ и ППН были несколько выше, чем у здоровых доноров. Высокие концентрации препарата вызывали 70—100% положительных реакций. Доза 8 мкг/мл давала 54% положительных реакций в РДБ, 64% — в РИМЛ и 65% — в тесте ППН. Показана достоверная разница в результатах у больных аллергодерматозами и у здоровых доноров (табл. 2).

Проведено сравнение показателей тестов и кожно-аллергических проб (табл. 3). Была отмечена корреляция РДБ с КАП: у 84% больных с положительными КАП по немедленному типу наблюдались высокие значения РДБ и лишь у 20% больных с отрицательными КАП — повышенные. Обнаружена резко выраженная разница в средних данных: соответственно 28,1±5,4 и 5,7±3,1 (Р<0,01). Показатели РИМЛ практически не зависели от данных кожных тестов: у больных с положительными и отрицательными КАП — соответственно 73% и 62% положительных реакций. Различие в средних значениях показателей РИМЛ также было недостоверным. Показатели теста ППН коррелировали с результатами кожных проб по немедленному типу: у 87% больных с положительными КАП были и повышенные значения показателей теста ППН, при отрицательных пробах тест ППН был положительным в 44% случаев. При сравнении средних величин различий не выявлено. Совпадений показателей теста ППН и результатов КАП по замедленному типу не было. По-видимому, вследствие сложности развития процесса замедленной гиперчувствительности кожно-аллергические пробы и реакции in vitro несут разную информацию о патологических изменениях, происходящих в организме.

Проведено одновременное изучение 3 различных партий аллергена Candida albicans в тестах РДБ, РИМЛ, ППН у 10 больных аллергодерматозами с предполагаемой кандидозной сенсибилизацией (табл. 4). Во всех случаях использовали одну и ту же концентрацию аллергена — 8 мкг/мл. По средним величинам и процентам положительных результатов различия показателей тестов in vitro в изученных партиях препарата были недостоверными, то есть разные партии аллергена стандартны.

Изучена возможность использования аллергена из дрожжеподобного гриба Candida albicans в качестве антигена в реакциях РДБ, РИМЛ и ППН. Высокие концентрации аллергена (120, 60, 30, 15 мкг/мл) оказывают неспецифическое цитотоксическое действие и вызывают положительные реакции почти в 100% случаев. Рабочее разведение препарата 8 мкг/мл одинаково реагирует во всех трех тестах и дает примерно такой же процент положительных результатов у больных аллергодерматозами, как и препарат для кожного тестирования. Полного совпадения показателей кожно-аллергических проб и тестов in vitro не было, особенно при диагностировании гиперчувствительности замедленного типа, поскольку механизм действия аллергена в кожных тестах и реакциях in vitro различен. Для улучшения выявления кандидозной сенсибилизации необходимо параллельно с кожными тестами исследовать показатели лабораторных тестов in vitro. Особенно важен их результат при невозможности постановки КАП из-за наличия противопоказаний или изменения кожной реактивности вследствие процессов, поражающих кожу (нейродермит, экземы и т. д.). В таких случаях тесты in vitro могут служить единственным критерием, подтверждающим наличие кандидозной сенсибилизации.

ВЫВОДЫ

1. Аллерген Candida albicans можно использовать в качестве специфического антигена в реакциях РДБ, РИМЛ и ППН. Постановка тестов in vitro параллельно с кожными пробами улучшает качество диагностики кандидозной сенсибилизации.

2. Для проведения тестов РДБ, РИМЛ и ППН следует применять рабочую концентрацию аллергена 8 мкг/мл. Более высокие концентрации препарата оказывают неспецифическое цитотоксическое действие.

3. Различные партии аллергена стандартны и могут быть использованы в реакциях РДБ, РИМЛ и ППН в одной и той же дозе.

4. Показатели тестов РДБ и ППН в большинстве случаев коррелируют с результатами кожно-аллергических проб по немедленному типу.

About the authors

E. A. Pazyuk

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan

V. M. Lukashkov

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan

N. I. Glushko

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan

I. V. Bulatova

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan

References

Supplementary files