Use of domestic acetate cellulose membranes for electrophoresis of blood serum proteins

Abstract

Protein electrophoresis on filter paper, used in clinical and biochemical laboratories, is a time-consuming procedure that takes 16-20 h. Electrophoresis in agar gel is labor-intensive. Polycrylamide gel is an excellent carrier for protein electrophoresis, but the use of this material in clinical laboratories is still very limited due to the difficulty of quantifying and interpreting the data obtained.

Full Text

Применяемый в практике клинико-биохимических лабораторий электрофорез белков на фильтровальной бумаге является длительной процедурой, занимающей 16—20 ч. Электрофорез в агаровом геле трудоемок. Превосходным носителем для электрофореза белков служит поликриламидный гель, однако применение этого материала в клинических лабораториях до сих пор весьма ограничено ввиду сложности количественного учета полученных данных и их интерпретации.

В 1957 г. Кон описал метод электрофореза белков на полосках из ацетата целлюлозы, который сочетает в себе простоту и быстроту.

В нашей стране электрофорез белков сыворотки крови проводят на пластинках из ацетата целлюлозы производства зарубежных фирм, однако недостаточная обеспеченность этими пластинками, а также необходимость проведения электрофореза этим методом в специальных камерах в значительной мере ограничивают их практическое применение.

В настоящей работе были использованы в качестве носителя для электрофореза белков сыворотки крови мембраны из ацетата целлюлозы тина Владинор» марки МФА-МА. выпускаемые Казанским производственным объединением «Тасма».

Мембраны размером 20 X Ю0 мм пропитывали веронал-мединаловым буфером с ионной силой 0,06 pH = 8,6. Сыворотку наносили на полоску краем отшлифованного предметного стекла или пастеровской пипеткой. Наилучшее разделение белков достигается при проведении электрофореза в течение 1,5—2 ч при напряжении 150 В. По окончании электрофореза полоски сушили на воздухе, а затем в сушильном шкафу при температуре 80°—90° в течение 10—15 мин. Лучшие результаты выявления белковых зон были получены при окрашивании пунцовым S, хотя окрашивание бром-феноловым синим также давало удовлетворительные результаты. Отмывание электрофореграмм проводили 3% раствором уксусной кислоты. Оценку белковых зон осуществляли на денситометре и элюированием 0.1 н. раствором NaOH. Выявляется 5 белковых фракций: альбумины, a₁-, a₂-, ß-, у-глббулины.

Полученные данные позволяют рекомендовать мембраны из ацетата целлюлозы типа «Владипор» марки МФА-МА для проведения электрофореза белков сыворотки крови в клинико-биохимических лабораториях. Использование мембран дает возможность сократить продолжительность анализа и увеличить количество исследований без снижения разрешающей способности метода.