The effect of specific inhibition of Hageman factor on contact-activated fibrinolysis

Abstract

Highly purified factor XII zymogen (Hageman factor) of human blood plasma, when bound to a foreign surface, is capable of self-activation by intramolecular proteolysis. The resulting active Hageman factor stimulates blood clotting along the internal and external pathways, kininogenesis and fibrinolysis. The aim of our work was to study contact-induced fibrinolysis with selective inhibition of factor XIIa in blood plasma.

Full Text

Высокоочищенный зимоген фактора XII (фактор Хагемана) плазмы крови человека при связывании с чужеродной поверхностью способен самоактивироваться путем внутримолекулярного протеолиза. Образующийся активный фактор Хагемана стимулирует свертывание крови по внутреннему и внешнему путям, киииногенез и фибринолиз. Целью нашей работы являлось изучение индуцированного контактом фибринолиза при селективном ингибировании фактора ХIIа в плазме крови.

Специфический ингибитор фактора ХIIа свертывания крови получали из кукурузы по методу ,Е. Хоима и соавт. (1980). Кровь от 4 доноров была взята венепункцией иглой с широким просветом во фторопластовую посуду и стабилизирована добавлением 0,1 М раствора оксалата натрия в соотношении 9:1. Препарат кукурузного ингибитора добавляли к плазме крови в количестве 0,125 мг/мл. Активность контактно активированного плазмина определяли эуглобулиновым методом В. А. Белицера и соавт. (1983). Из нативной и, обработанной ингибитором плазмы осаждали фракцию эуглобулинов, которая содержала плазмин, активированный при инкубации с каолиновой взвесью. Смесь из 0,2 мл суспензии эуглобулинов, 0,3 мл мединалового буфера pH 7,6 и 0,1 мл 0,5% раствора фибриногена свертывали в силиконированных пробирках диаметром 8 мм, добавляя 0,1 мл 0,5% раствора тромбина, и определяли время лизирования сгустка фибрина. Тромбоэластографически контактно активированный фибринолиз регистрировали на гемокоагулографе. Для получения адекватной амплитуды и продолжительности записи на ленте при формировании сгустка в кювете прибора использовали 0,025 мл 2% раствора фибриногена, 0,050 мл суспензии эуглобулинов, фракционированных из 2,5 мл плазмы крови, 0,025 мл 0,116 М раствора хлорида кальция.

Время лизиса фибринового сгустка, содержащего фракцию эуглобулинов из неингибированной плазмы крови, составляло в среднем 21,6±7,7 мин, а при добавлении кукурузного ингибитора — 29,3±6,1 мин, то есть произошло замедление контактно активированного фибринолиза (Р<0,001). Соответствующие показатели при тромбоэластографическом методе исследования (см. - рис) для неингибированной плазмы равнялись 64,0±3,0 мин, для ингибированной плазмы— 182,0±58,3 мин (Р<0,05).

Тромбоэластограммы контактно активированного фибринолиза: / — для неингибированной плазмы; 2 и 3 — для плазмы, обработанной кукурузным ингибитором (начало и конец показаны раздельно).

Как видно, кукурузный ингибитор вызывает торможение индуцированного контактом с поверхностью фибринолиза, что вызвано избирательным ингибированием факторов ХIIа и Xllf, ответственных за аутоактивацию и протеолитическое превращение прекалликреина в калликреин. Выраженное замедление, но не полное угнетение фибринолиза свидетельствует, что из участия в запуске последовательных реакций гемокоагуляции выключается только часть активного фактора Хагемана, необходимая для поддержания фибринолитической способности плазмы крови на нормальном уровне.