The role of sensitized lymphocytes in the immunogenesis of acute dysentery

Abstract

This work presents materials on the study of the transformation of lymphocytes in vitro in patients with dysentery stimulated with dysentery in comparison with a skin test for the same protein allergen [3].

Full Text

В настоящей работе представлены материалы по изучению трансформации лим­фоцитов in vitro у больных дизентерией при стимуляции дизентерином в сопоставле­нии с кожной пробой на этот же белковый аллерген [3].

Исследования бласттрансформации лимфоцитов (БТЛ) мы проводили в культурах лейкоцитов по методике, описанной ранее [1, 2]. При стимуляции фитогем агглютини­ном (ФГА) фирмы Wellcome изучали 3-дневные, а при стимуляции дизентерином (производства Ленинградского НИИ вакцин и сывороток) и без стимуляции — 6-дневные культуры клеток крови. Стимуляция ФГА была использована для установления общей неспецифической способности лимфоцитов к трансформации.

Оптимальная стимулирующая доза дизентерина была определена путем титрова­ния. Она составила в разведении 1 : 10 0,25 мл на 3 мл культуральной среды. ФГА брали в дозе 30 мкг на 3 мл среды.

Всего поставлено в динамике заболевания 292 культуры клеток крови 47 взрослых и 23 детей, больных острой формой дизентерии, и 83 культуры 21 здорового донора (контроль). Одновременно больным делали внутрикожную пробу на дизентерии по общепринятой методике.

У всех обследованных диагноз был подтвержден высевом дизентерийной палочки Зонне или Флекснера (соответственно у 42 и у 28 чел.). Все они в комплексе лечения получали антибиотики и другие химиопрепараты. Течение болезни было легким или среднетяжелым с исходом в выздоровление.

Было установлено, что дизентерии в отличие от ФГА не оказывает стимулирую­щего эффекта на клетки крови здоровых людей. Данные БТЛ у доноров позволили оценить бластоидную реакцию как положительную, если количество бластных клеток в препарате было >5 на 100 лимфоцитов.

Результаты БТЛ у взрослых больных дизентерией в сопоставлении с контролем ^позволяют высказаться в пользу специфичности этой реакции на дизентерии (см. табл.).

Бласттрансформации лимфоцитов у взрослых больных дизентерией
и здоровых доноров (М ± т)

Культуры, содержащие:

Обследованные		Груп­пы	дизентерии 0,25 мл/3 мл	Р	ФГА 30 мкг/З мл __	Р	Культуры без анти­генов
Доноры		1	2,15 ± 0,42	< 0,001	44,5 ± 3,04	< 0,001	1,33 ± 0,23
Больные дизентерией	1—7-й дни болезни 15—21-й дни болезни	2 3	5,77 ± 0,98 20,1 ± 3,29	<0,01 < 0,05	44,93 ± 4,69 51,19 ± 4,67	< 0,001 < 0,001	2,86 ± 0,52 3,56 ± 0,75
Показатели достоверности		1 и 2 — Р < 0,01; 2 и 3 —Р <0,001; 1 и 3 — Р < 0,001.			Р > 0,05		1 и 2 — Р < 0,05; 1 и 3 — Р < 0,01.

Как видно из данных таблицы, среднее количество бластных клеток в специфи­чески стимулированных клеточных культурах на 1—7-й день болезни было в 2 раза, а на 15—21-й день — в 5,5 раза выше, чем в нестимулированных культурах, и соответственно в 2,5 и 10 раз выше, чем в аналогичных культурах здоровых доноров;' (Р < 0,01—0,001); бластоидная реакция на ФГА у больных и здоровых доноров не имела существенных различий между собой.

Спонтанная БТЛ у больных как на 1-й, так и особенно на 2-й неделе болезни была существенно выше (Р < 0,05—0,01), чем у доноров. Исключить значение компо­нентов аутологичной плазмы больных, добавляемой в культуры клеток крови, не пред­ставляется возможным: они могли активировать спонтанную трансформацию сенсиби­лизированных лимфоцитов.

На 3-й неделе болезни, т. е. в стадии выздоровления, по сравнению с 1-й неделей бластоидная активность клеток у больных существенно повышается (в 3,5 раза) в культурах с дизентерином и несущественно — в культурах с ФГА и без стимуляции. Следует отметить, что у больных на всех сроках исследования БТЛ на дизентерии была достоверно выше, чем без стимуляции, но значительно слабее, чем на ФГА, т. е. на неспецифическую стимуляцию. Интенсивность БТЛ на специфическую стимуляцию повышается по мере выздоровления больных.

Внутрикожную пробу на дизентерии мы проводили одновременно в сроки иссле­дования на БТЛ. Положительная внутрикожная проба была отмечена на 1-й неделе- болезни у 17 из 33, на 3-й — у 25 из 47 больных. Соответственно положительная БТЛ на дизентерии была у 21 из 44 чел. Следует отметить, что положительная БТЛ на специфическую стимуляцию наблюдалась одинаково часто у больных как с положи­тельной, так и с отрицательной внутрикожной пробой.

У детей, больных острой дизентерией, БТЛ на дизентерии и спонтанная, как и у взрослых, существенно повышалась по мере выздоровления (Р < 0,01—0,001). Однако на 1-й неделе болезни БТЛ была у них отрицательной, не имела существенных разли­чий с контролем, хотя при стимуляции ФГА активность лимфоцитов оказалась доста­точно высокой. Только на 3-й неделе болезни интенсивность БТЛ на дизентерии, ФГА и без стимуляции существенно увеличивалась и становилась достоверно выше- контроля.

У больных детей не было также корреляции между БТЛ и кожной пробой.

Очевидно, что по мере выздоровления значительно возрастает число больных, у которых циркулирующие лимфоциты способны к трансформации при контакте с ди­зентерином in vitro, и существенно не изменяется число больных, положительно реаги­рующих на введение этого антигена внутрикожно. Есть основания заключить, что процесс выздоровления при острой дизентерии сопряжен с наличием антигенчувствительных лимфоцитов в циркулирующем пуле клеток крови.

Мы полагаем, что у больных острой дизентерией, леченных химиопрепаратами, способность лимфоцитов к трансформации при неспецифической стимуляции ФГА, находится на таком же уровне, как у здоровых доноров, т. е. общая иммуногенная- активность лимфоцитов при этой болезни, видимо, не повреждается. Однако трансфор­мация лимфоцитов на дизентерии (специфическая стимуляция) достоверно увеличи­вается у больных по сравнению со здоровыми донорами. Еще более важно, что БТЛ существенно повышается по мере выздоровления, оставаясь в то же время на всех; стадиях болезни пониженной по сравнению со стимуляцией ФГА. Это с несомнен­ностью указывает на избирательную реакцию какой-то части циркулирующих лимфо­цитов на воздействие специфическими антигенами. Такую активность могут проявить- только сенсибилизированные лимфоциты. Бласттрансформация лимфоцитов при сти­муляции дизентерином у больных острой дизентерией, как взрослых, так и детей, более- четко отражает участие сенсибилизированных лимфоцитов в иммуногенезе этой инфекции, чем внутрикожная проба.