Blood examination by leucocyte concentration method in patients with acute leukaemia

Abstract

One of the modern methods that allow peripheral blood to be studied on a broad morphological scale is the leukoconcentration method. It can be used to increase the concentration of leucocytes in a preparation by a factor of 50-60 compared to the initial level, i.e. to achieve a concentration of bone marrow punctate cells. Haematologists have been using this method since the 50s to detect blood elements rarely seen in conventional tests.

Full Text

Одним из современных методов, позволяющих изучать периферическую кровь в широком морфологическом плане, является метод лейкоконцентрации. При его использовании можно увеличить концентрацию лейкоцитов в препарате в 50—60 раз по сравнению с исходным уровнем, т. е. достичь концентрации клеток костномозгового пунктата [4]. Гематологи применяют этот метод с 50-х годов для выявления элементов крови, редко встречающихся при обычных исследованиях.

В 1964 г. H. Т. Фокина и соавт. применили метод лейкоконцентрации для дифференциальной диагностики острых лейкозов и апластических состояний.

Е. Б. Владимирская (1964) и Р. А. Поспелова (1967) считают, что при алейкемической форме острого лейкоза картина лейкоконцентрата дает возможность установить диагноз без стернальной пункции и что по результатам исследования концентрата лейкоцитов можно судить о наступлении ремиссии у больных острым лейкозом.

Особенно ценно, что исследование концентрата лейкоцитов способствует выявлению начальных стадий острого лейкоза, в частности при алейкемических формах заболевания. Поступающие в периферическую кровь единичные бластные клетки нейтрофильного ростка могут не попасть в препарат. В лейкоконцентрате же возможность их обнаружения значительно возрастает. Кроме того, даже опытным гематологам не всегда удается отличить парамиелобласт от лимфоцита. Поэтому при увеличении концентрации клеток в поле зрения и обнаружении типичных гемоцито- и миелобластов возрастает возможность своевременной диагностики лейкопенических форм острого лейкоза.

На рис. 1 показан общий вид лейкоконцентрата больной Б. с лейкопенической формой острого лейкоза (большое увеличение). Количество лейкоцитов в периферической крови— 1000.

Под нашим наблюдением находилось 9 больных с острым лейкозом (возраст 24—36 лет; мужчин — 3, женщин — 6).

У 6 чел. давность заболевания исчислялась 2—3 месяцами, заболевание выявлено впервые. До поступления в стационар они никакого лечения не получали. У остальных 3 больных давность заболевания — около года. До нашего обследования они лечились в стационарах переливаниями крови и витаминами. Цитостатических препаратов ни один больной не получал.

Острый миелоз был у 7 чел., острый гемоцитобластоз — у 2. Больные обследованы в общеклиническом плане. Кроме того, мы сопоставляли данные исследования периферической крови, взятой из пальца обычным способом, и концентрата лейкоцитов, приготовленного из венозной крови по методу Н. Фокиной с 6% трилоном Б, а также последние — с данными анализа костномозгового пунктата. Полученные результаты обработаны статистически.

Рис. 1. Лейкоконцентрат больной Б. с острым лейкозом. Миелобласт и группа лимфоцитов. Анизопойкилоцитоз. Окраска по Лейшману. 7 X 90.

Рис. 2. Лейкоконцентрат больной К. с острым лейкозом. Промиелоцит, палочкоядерный нейтрофил и миелоцит и 2 лимфоцита. Окраска по Лейшману. 12 X 90.

При первом исследовании периферической крови лейкопения определялась у 6 больных, лейкоцитоз — у 3. Однако при дальнейших исследованиях оказалось, что количественные показатели лейкоцитов очень нестойки, и на протяжении короткого времени лейкоцитоз легко сменялся лейкопенией, и наоборот.

При сопоставлении результатов многократных исследований периферической крови и лейкоконцентрата мы заметили, что многие клетки нейтрофильного ряда, особенно незрелые, встречаются в лейкоконцентрате у большего числа больных и в значительно большем проценте.

Так, в периферической крови гемоцитобласты (миелобласты) не были найдены у 2 больных, а у 7 их содержание составляло от 3 до 96%. В лейкоконцентрате бластные клетки обнаружены у всех больных от 7,2 до 94,8% (Р<0,02). Эозинофильно-базофильная диссоциация также была ярче выражена в лейкоконцентрате. Базофильные клетки в периферической крови отсутствовали, тогда как в концентрате лейкоцитов они регулярно встречались у 5 больных от 0,4 до 1%. Эозинофильные клетки в периферической крови установлены у 2 больных от 1 до 5%, а в лейкоконцентрате — у 4 от 0,2 до 2,2%. Лейкемический провал гораздо меньше выражен в лейкоконцентрате, чем в периферической крови: промиелоциты выявлены в периферической крови только у 1 из 9 больных острым лейкозом до 1 % клеток, тогда как в концентрате лейкоцитов — у 7 от 0,2 до 7,8% (см. рис. 2). Нейтрофильные миелоциты обнаружены в периферической крови у 2 больных ют 1 до 6%, в лейкоконцентрате — у всех от 0,2 до 4,6%; нейтрофильные метамиелоциты найдены в концентрате лейкоцитов у всех больных от 0,2 до 3,6%, а в периферической крови только у 4 от 1 до 4%. Плазматические клетки в лейкоконцентрате встречались постоянно у всех больных от 0,2 до 5,6%, в периферической же крови — у 2 до 1%. В концентрате лейкоцитов часто можно было наблюдать также нормобласты, которые ни разу не встречались в периферической крови (рис. 3).

Рис. 3. Лейкоконцентрат больной М. с острым лейкозом. Полихроматофильный нормобласт и лимфоцит. Окраска по Лейшману. 7 X 90.

Рис. 4. Лейкоконцентрат больной И. с острым лейкозом. Вакуолизированная и дегенеративно измененная нейтрофильная клетка и разрушенная клетка. Окраска по Лейшману. 12 X 90.

При качественном сравнении мазков периферической крови и концентрата лейкоцитов оказалось, что лейкоконцентрат дает гораздо больше возможностей изучать и структурные изменения клеток при лейкозе. Так, отчетливее становится диссоциация в созревании ядер и цитоплазмы лейкоцитов, чаще встречается гиперсегментация ядер нейтрофилов. Нередко можно было встретить гигантские формы нейтрофильных клеток, и только в концентрате лейкоцитов встречались нейтрофилы с токсической зернистостью цитоплазмы. Это, возможно, связано с тем, что у больных острым лейкозом при быстром разрушении патологических клеток многие из них еще могут содержаться в венозной крови, но уже не доходят до капилляров пальца. Кроме того, так как при лейкопенических формах острого лейкоза в периферическом русле часто мало лейкоцитов, не только качественные морфологические исследования, но даже и подсчет бывает очень затруднен.

Иллюстрацией к сказанному может служить рис. 4 (лейкоконцентрат больной И. с острым лейкозом), на котором видны вакуолизированные и дегенеративно измененные нейтрофильные клетки при совершенно нормальных эритроцитах, а также разрушенная клетка.

При сравнении концентрата лейкоцитов с пунктатом костного мозга было установлено, что в лейкоконцентрате регулярно обнаруживалось меньше бластных клеток (ретикулярных клеток при Р<0,05 и миелобластов — гемоцитобластов при Р<0,01), но больше более зрелых клеток нейтрофильного ряда, чем в костном мозгу. Так, наблюдалось достоверное увеличение нейтрофильных миелоцитов (Р<0,05) и палочкоядерных клеток (Р<0,05). Это увеличение было относительным, так как многие бластные клетки были уже разрушены в венозной крови. Количество разрушенных клеток в лейкоконцентрате колебалось от 150 до 335, а в пунктате костного мозга —от 45 до 180 на 500 подсчитанных клеток. Попутно мы обратили внимание, что содержание лимфоцитов в лейкоконцентрате из венозной крови всегда было больше, чем в пункта- те костного мозга (Р<0,05). Это объясняется поступлением лимфоцитов в венозное русло из лимфатической системы других органов.

Итак, сравнивая препараты концентрата лейкоцитов, стернального пунктата и периферической крови, можно сделать следующие выводы.

1. Методика получения концентрата лейкоцитов гораздо проще и менее травматична, чем стернальная пункция, и поэтому больше пригодна для динамического наблюдения за кроветворением.
2. Лейкоконцентрат не заменяет стернальной пункции, но дает возможность следить в динамике за изменениями кроветворения у больных острым лейкозом, не производя стернальной пункции, так как по клеточному составу лейкоконцентрат ближе к пунктату костного мозга, чем к периферической крови.
3. Метод концентрации лейкоцитов имеет большие преимущества перед исследованием периферической крови, так как дает возможность выявить большее количество патологических форм лейкоцитов и лучше изучить структуру этих клеток.