Pitherapeutic value of fibrinolysis in some gynecological bleeding

Abstract

In recent years, the fibrinolytic blood system has attracted the attention of not only physiologists and biochemists, but also a wide range of practitioners of all specialties.

Full Text

В последние годы фибринолитическая система крови привлекает к себе внимание не только физиологов и биохимиков, но и широкого круга практических врачей всех специальностей.

Фибринолитическая система—сложная ферментативная система, в которую входят активируемые, активирующие и ингибиторные агенты. Она является частью общего сложного биологического процесса, происходящего в крови.

Шарп (1964) указывает, что хотя механизм фибринолиза на первый взгляд является простым, точный путь фибринолиза еще не совсем ясен. Он дает следующую схему механизма фибринолиза (см. рис. 1 на стр. 51).

Нормальная кровь содержит в значительном количестве неактивный профермент плазминоген (профибринолизин) и проактиватор плазминогена, а также в большом количестве ингибиторы плазмина (антиплазмины). Наличие активаторов плазмино­гена в различных тканях человека и животных впервые описали Аструп и Пермнн (1947), Альбрехтсен (1957).

Высоким содержанием активатора отличаются органы, имеющие латентную тен­денцию к кровотечениям (легкие, матка, яичники, простата, щитовидная железа, надпочечники и лимфоузлы).

В крови и некоторых тканях также обнаружены лизокиназы, которые активируют проактиватор плазминогена крови в активатор.

Фиернли и др. (1953, 1955) при определенных условиях (низкая температура) наблюдали спонтанные случаи низкого уровня фибринолитической активности у нор­мальных взрослых людей, не подвергнутых стрессу (у 50 чел. из 60). О наличии в крови некоторого количества активного плазмина сообщают также Макфарлан и Пеллинг (1946), Г. В. Андреенко (1964) и др. Это, по-видимому, является ответом напостоянное присутствие в циркулирующей крови тромбина в небольшой концентра­ции, как это было установлено Д. М. Зубаировым (1961, 1962). Пейдж и др. (1951) замечают, что большинство из демонстраций активности плазмина в человеческой крови зависит от разведения плазмы (разведение уменьшает ингибиторную актив­ность в большей степени, чем энзимную). Авторы не могли показать фибринолити­ческую активность в неразведенной плазме у собак.

Рис.1

Издавна акушеров-гинекологов интересует жидкое состояние менструальных вы­делений. Белл (1913) был первым, кто сообщил об отсутствии фибриногена в кро­вянистых выделениях из влагалища. Вайтгауз (1914) установил, что кровь, получен­ная из полости матки во время менструации, всегда сначала свертывается, а затем подвергается лизису. Лознер и соавторы (1942) утверждают, что менструальная кровь является сывороткой, содержащей форменные элементы и обрывки эпителия.

Мнения исследователей о фибринолитическом потенциале в циркулирующей крови во время менструации и при дисфункциональных маточных кровотечениях разно­речивы. Одни авторы (Смит и Смит, Вильсон и Муннелл, 1945, 1946, А. А. Радионченко, 1962; Н. А. Васюк, 1964) признают повышение фибринолитической актив­ности, а другие (Лознер и соавт., 1942; Макфарлан и Биггс, 1946; Рао, 1964; Беллер и др., 1964) не обнаружили изменений фибринолитического потенциала в цирку­лирующей крови.

Цель настоящей работы заключается в анализе общего и местного фибриноли­тического потенциала при некоторых дисфункциональных маточных кровотечениях.

Методика. Исследования проводились модифицированным методом Аструпа и Мюллертца (1952), описанного Перликом (I960), и методом Лассена (1952) на фибрин-агаровых и гретых фибриновых пластинках. Для них не требуется наличия фибриногена или сгустка крови в определяемом субстрате. Метод фибрин-агаровых пластинок дает суждение о плазмине и тканевом активаторе, а метод гретых фибри­новых пластинок — только об активном плазмине.

Субстрат, проверяемый на фибринолитическую активность, наносили на поверх­ность фибрина и после инкубации в термостате в течение 20 часов при температуре 37° измеряли зону лизиса.

Реагенты: 1) 0,2 и 0,6% растворы фибриногена, полученного из бычьей крови по методике Кеквика (1946); 2) раствор тромбина с активностью 100 или 40 ед/мл (тромбин без плазминогена, изготовленный Каунасским институтом эпиде­миологии, микробиологии и гигиены); 3) вероналовый буфер pH 7,8; 4) физиологи­ческий раствор; 5) агар-агар.

Приготовление фибриновых пластинок. 9 мл 0,2% раствора фиб­риногена в вероналовом буфере смешивали быстро в колбочке с 0,2 мл раствора тромбина 100 ед./мл активности или 0,5 мл 40 ед./мл активности в физиологическом растворе и тотчас переносили в чашку Петри (фирмы «Orion»). Чтобы слой фибрина равномерно покрывал дно, мы ставили чашку Петри на стеклянную подставку с уровнем. Для инактивации плазминогена фибриновые пластинки помещали в термо­стат на 35 мин. при температуре 85°.

Для получения фибрин-агаровых пластинок мы смешивали 0,6% раствор фиб­риногена с 1,5% раствором агара в соотношении 1:4. 15 мл раствора фибриноген­агара смешивали в колбочке с 0,5 мл раствора тромбина 40 ед./мл активности и быстро переносили в чашку Петри. На фибрин-агаровом слое делали 6 лунок диамет­ром 6 мм. Исследуемый субстрат в количестве 0,03 мл наносили на поверхность фибринового слоя или в лунки фибрин-агаровой пластинки и ставили в термостат при температуре 37°. Определение фибринолитической активности производили изме­рением зон лизиса. Измеряли 2 взаимно перпендикулярных диаметра с помощью штангенциркуля. Полученный результат выражали в квадратных миллиметрах. Активность каждого субстрата определяли в трех зонах и выводили среднее число. Зоны лизиса можно сфотографировать путем непосредственного контакта светочувст­вительной бумаги с чашкой Петри. Такой способ применен нами для гретых пласти­нок, где зоны лизиса видны в виде темных пятен (рис. 2). Можно сфотографировать фотоаппаратом, как мы поступили с фибрин-агаровыми пластинками, где зоны лизиса четко и ясно видны вокруг лунки в виде темного ореола (рис. 3). При отсутствии фибринолитической активности зоны лизиса нет, а в фибриновом слое видны участки помутнения на месте нанесенного субстрата.

Рис.2

Рис.3

Предметом исследования для суждения о фибринолитической активности в циркулирующей крови служила цитратная плазма. Для этой цели кровь брали из локтевой вены в пробирку, содержащую 3% раствор цитрата натрия, в соотношении 1:9. Кровь центрифугировали в течение 5 мин. при 3000 об/мин. Полученную плазму использовали в течение первых 5—10 мин. Для определения местного потенциала фибринолитической активности маточные кровянистые выделения из влагалища отсасывали шприцем Брауна в пробирку с раствором цитрата натрия и подвергали центрифугированию.

Материалы и результаты исследования. Мы изучали состояние фибринолитической активности у 56 женщин: у 35 при климактерических кровотече­ниях, у 11 при ювенильных и у 10 практически здоровых женщин во время менструации. Больные с маточными кровотечениями поступали в разные сроки кровотечения, в основном от 7-го до 22-го дня. У практически здоровых исследование проводилось на второй день менструации.

Результаты лизиса, выраженные в квадратных миллиметрах, были переведены в единицы активности плазмина. Для этой цели нами был использован плазмин (фибри­нолизин) Горьковского института эпидемиологии и микробиологии. Средние резуль­таты исследования представлены в табл. 1.

Полученные данные показывают, что вышеописанными методами исследования в неразведенной крови из локтевой вены определить фибринолитическую активность не удается, тогда как в маточных кровянистых выделениях определяется местная фибринолитическая активность.

Каждой больной с климактерическим кровотечением произведено выскабливание полости матки с целью исключения злокачественных новообразований матки. После выскабливания полости матки кровотечение в большинстве случаев останавливалось. Это мы склонны объяснить удалением источника тканевого активатора — поверхносткого слоя эндометрия. С восстановлением поверхностного слоя эндометрия рецидива кровотечения могут повториться.

Местный и общий фибринолиз

Группа женщин	В крови		В маточных кровянистых выделениях
	активный плазмин	активный плазмин + + тканевой активатор	активный плазмин (в ед.)	активный плазмин +  + тканевой активатор (в ед.)
С климактерическими кровотече­ниями С ювенильными кровотечениями Здоровые во время менструации	0	0	0,187	0,322
	0	0	0,093	0,276
	0	0	0,103	0,188

В отдельных случаях для лечения дисфункциональных маточных кровотечений, особенно ювенильных, мы применяли ингибитора активатора плазминогена—эпсилон- аминокапроновую кислоту (ЭАКК). Так, 3 больным с ювенильным кровотечением мы вводили по 100 мл 6% раствора ЭАКК внутривенно капельно (50—60 капель в мин.), одной — однократно, второй — двукратно, третьей — трехкратно. К концу введения препарата кровотечение прекращалось или резко уменьшалось. У одной больной после однократного введения препарата кровотечение прекратилось и больше не возобновлялось, у двух возобновилось через 20—24 часа, поэтому потребовалось повторное введение препарата. Можно полагать, что остановка кровотечения на опре­деленное время наступает из-за торможения ЭАКК фибринолитической активности в эндометрии. При однократном назначении ЭАКК через 24 часа выделение ее из организма фактически заканчивается (Мак Николь и Дуглас, 1964). Этим и объяс­няются рецидивы кровотечения через 24 часа и необходимость повторного применения.

Полученные данные позволяют сделать предварительное заключение, что локаль­ная активация фибринолитической системы может служить существенным звеном в патогенезе кровотечения, без заметного изменения общего фибринолиза. Поэтому применение ингибиторов плазмина, в частности ЭАКК, показано и в тех случаях, когда при исследовании крови из общего кровотока не удается выявить повышения фибринолитической активности. Решающим показанием в таких случаях может быть исследование местной активности фибринолитической системы.