EXPERIENCE OF APPLICATION OF THE METHOD OF FLUORESCING ANTIBODIES IN DIAGNOSTICS OF COLIENTERITES.

Abstract

Clinical diagnosis of colienteritis in children is rather difficult due to the similarity of symptoms observed in diseases of other etiology.

Full Text

Клиническая диагностика колиэнтеритов у детей довольно трудна ввиду сходства симптомов, наблюдаемых и при заболеваниях другой этиологии. Окончательный диагноз колиэнтерита ставится только при выделении патогенного штамма кишечной палочки из испражнений больного ребенка.

Применение обычного бактериологического метода диагностики дает сравнительно невысокую высеваемость патогенных кишечных па­лочек среди детей с острыми желудочно-кишечными заболеваниями недизентерийной этиологии; по нашим данным, в Казани она состав­ляет 20,1%, а среди всех больных острыми желудочно-кишечными за­болеваниями— 11,2%. Кроме того, результаты получаются лишь на 3 сутки.

Перед нами встала задача применения более быстрых и чувстви­тельных методов диагностики колиинфекций у детей.

В литературе предлагается метод флуоресцирующих антител для выявления и идентификации бактериальных клеток. Е. А. Кабанова с сотрудниками, Г. А. Стычинскии, Петуели и Линдер с успехом применяли данный метод для ускоренного обнаружения патогенных серотинов кишечных палочек в испражнениях больных детей. Сущность ме­тода в том, что получают флуоресцирующие антитела, которые исполь­зуются в виде иммуноспецифических красок для выявления патоген­ных бактерий.

Мы применили метод флуоресцирующих антител для обнаружения патогенных кишечных палочек типов 0—26, 0—55, 0—111, 145 в испражнениях у детей, страдаю­щих кишечной дисфункцией (жидкий стул).

Работа проводилась по методике Е. А. Кабановой, А. И. Глубокиной и др.

Нами использованы групповые агглютинирующие колисыворотки и флуоресцеип- изоцианат, 1-й изомер, серия 38, с концентрацией 11,3 мг/мл и относительной интен­сивностью флуоресценции 44,7% (Всесоюзный институт химических реактивов). Ис­пражнения для посевов брали трубочками Цимана, посев производили в пробирки на скошенную среду Эндо, которые помещали в термостат при температуре 37° на 18 ча­сов, затем на одном предметном стекле делали 4 густых мазка в 4 каплях физиоло­гического раствора. Мазки высушивали на воздухе, фиксировали в этиловом спирте в течение 15 мин, снова высушивали, после чего помещали во влажную камеру и окрашивали: 1-й мазок флуоресцирующей сывороткой типа 0—26, 2-й — 0—55, 3-й — О—111, 4-й-—145. Через 30 мин-препарат промывали в течение 15 мин в меняющемся физиологическом растворе. Окрашенные мазки микроскопировали в упрощенном био­логическом ультрафиолетовом микроскопе с синим и желтым светофильтрами (Ж. С. — 17), объектив —90 X и окуляр — 4 Х - 7 X. При микроскопии выявлялось яркое зеленое специфическое свечение патогенных кишечных палочек, особенно перифе­рии.    

Параллельно для сравнения результатов производилось общепри­нятое бактериологическое исследование.

Нами обследован 421 ребенок (1103 исследования). Большинство детей поступало по поводу кишечной дисфункции с диагнозами диспеп­сия (простая, токсическая), энтерит, дизентерия (?), пищевая инток­сикация. Обследовались также дети раннего возраста из дизентерий­ного отделения (37 человек) и дети в соматических отделениях, у ко­торых выявлен жидкий стул, 44 ребенка обследованы еще на дому до поступления в стационар.

От 421 больного патогенные штаммы кишечной палочки методом флуоресцирующих антител были выделены у 140 (33,3%), тогда как общепринятым бактериологическим методом они найдены только у 41 ребенка (9,7%). У 22 детей (из 140) лаборант-бактериолог не мог произвести исследование на патогенные штаммы кишечной палочки из-за обильного разрастания протея, у 77 результаты бактериологи­ческих анализов были отрицательны, в то время как люминисцентно-серологическим способом патогенные кишечные палочки обнаружива­лись в небольшом количестве, но не меньше 1—2 в каждом поле зре­ния. Таким образом, общепринятым бактериологическим способом па­тогенные кишечные палочки выявлялись обычно только при массивном бактериовыделении.

У 3 больных общепринятым бактериологическим способом выделе­ны патогенные штаммы кишечной палочки, не окрашивающиеся мече­ным специфическим глобулином.

В возрасте до 1 мес. обследовано 20 детей, из них патогенные ки­шечные палочки обнаружены у 3, от 1 до 2 мес.— у 17; выделены толь­ко у одного. Из 25 детей от 2 до 3 мес. патогенные кишечные палочки найдены уже у 8.

Наибольшее количество больных колиэнтеритом (98) выявлено среди детей, находившихся в диагностическом кишечном отделении. В сома­тических отделениях колиинфекция обнаружена у 19 детей, которые госпитализированы в стационар без подозрения на кишечную инфек­цию с пневмонией, гипотрофией и др. У них был жидкий стул. У 3 де­тей из дизентерийного отделения также диагностирован колиэнтерит, а не дизентерия. У 3 детей из туберкулезного отделения обнаружена колиинфекция, и у 17 она установлена при обследовании еще на дому. Эти наблюдения свидетельствуют о высокой распространенности коли- инфекции в Казани среди детей раннего возраста, страдающих кишеч­ной дисфункцией в виде жидкого стула. Из 140 больных колиэнтеритом при первом положительном посеве выделялись следующие типы кишечной палочки: 0—26—14; 0—55 — 42; 0—111—32; 145 — 44; сме­шанная колиинфекция — 7; дизентерия колиинфекция — 1.

У большинства (у 104 из 140) патогенные кишечные палочки выде­лены методом флуоресцирующих антител при первичном исследова­нии; у 8 —при втором анализе, у 9 — при третьем, у 5 —- при четвер­том. Таким образом, в первые 4 дня колиинфекция была распознана у 126 детей (из 421); у 14 после пятого дня пребывания в диагности­ческом стационаре, что не исключает возможности внутрибольничного заражения.

При работе с колиинфекциями в диагностическом кишечном отде­лении мы еще раз убедились в большой контагиозности этой инфек­ции; так, у 19 детей за время пребывания в стационаре выявлена перекрестная инфекция другим патогенным штаммом кишечной палоч­ки, это сопровождалось обычно обострением процесса и задерживало выздоровление. Выявление перекрестной инфекции заставило пере­строить работу диагностического кишечного отделения таким образом, что больные распределялись в палатах по типам возбудителя. Только при такой раздельной госпитализации со строгим соблюдением дезо­режима нам удалось исключить перекрестное инфицирование.

Применение высокочувствительного метода диагностики колиинфекции ускорило распознавание этого заболевания у детей, что позволило рано начинать этиотропное и патогенетическое лечение, при котором мы наблюдали быстрое улучшение состояния детей даже в очень тя­желых случаях заболевания.

У большинства детей патогенные кишечные палочки не выделяются уже через несколько дней с начала лечения мицерином; так, у 70 боль­ных из 140 В. coli обнаружены однократно, у 38 — в двух первых посе­вах, у 22 отмечалось более длительное бактериовыделение, вызванное у 12 перекрестной инфекцией, у 10 после отмены лечения мицерином вновь начинал выделяться тот же штамм, исчезновение которого насту­пало при назначении лечения мономицином в сочетании со стимулирую­щей терапией и рациональным питанием.

Данный метод диагностики выявил большую распространенность колиинфекций у детей, страдающих кишечной дисфункцией недизенте­рийной этиологии.

Метод флуоресцирующих антител может быть использован не толь­ко для выявления этиологии острых желудочно-кишечных заболеваний у детей раннего возраста, но и в изучении многих неясных вопросов патогенеза колиинфекций.

ВЫВОДЫ:

1. Применение метода флуоресцирующих антител в диагностике колиэнтеритов позволило установить в Казани высокую распространен­ность колиинфекций у детей раннего возраста, страдающих кишечной дисфункцией в виде жидкого стула.
2. Метод флуоресцирующих антител при исследовании испражнений на патогенные кишечные палочки у детей дает в 3—4 раза больше положительных результатов анализов по сравнению с общепринятым бактериологическим методом.
3. Наблюдения подтверждают большую контагиозность колиэнте­ритов.
4. Для предупреждения перекрестной инфекции патогенными ки­шечными палочками необходима госпитализация больных колиэнтеритами в отдельные палаты по типу возбудителя, лучше в боксированные отделения.
5. Для предупреждения суперинфекции у выздоравливающих де­тей и сокращения длительности бактериовыделения госпитализация вновь поступающих больных должна производиться в изолированные палаты.
6. В связи с высокой распространенностью и большой контагиозностыо колиинфекций необходимо строжайшее соблюдение дезорежи­ма во всех Отделениях для детей раннего возраста.