Antiformin and its preparation. Ether-acetone combination of anti-formin method. On the question of the significance of the detection of tuberculosis bacteria in the blood

Abstract

Antiformin, which is currently a central product for the detection of single specimens of tuberculosis bacteria in the studied material (sputum, pus, blood, exudates, etc.), which has a remarkable ability to dissolve substances in a very short time, is It is mixed with jelly (according to the patent — labarracic) water with edible soda, the content of which extends to 7.5% at 6% sodium chloride.

Full Text

Антиформинъ, являющійся въ настоящее время цѣпнымъ продуктомъ для обнаруженія единичныхъ экземпляровъ туберкулезныхъ бактерій въ изслѣдуемомъ матеріалѣ (мокротѣ, гною, крови, эксудатахъ и пр.), обладающій замѣчательнымъ свойствомъ въ короткое время растворять почти всѣ органическія вещества и бактеріи, за исключеніемъ кислотоупорныхъ, представляетъ изъ себя смѣсь жавелевой (по патенту—лабарраковой) воды съ ѣдкимъ натромъ, содержаніе котораго простирается до 7,5% при 6% хлориноваго натра.
Являясь патентованнымъ продуктомъ заграничнаго приготовленія антиформинъ при выпискѣ его изъ-за границы (для продажи въ аптекахъ онъ черезъ таможню не пропускается) обходится не дешевле 1’/2—2 руб. за kilo (на мѣстѣ приготовленія литръ антиформипа стоитъ около 25 коп.), а между тѣмъ можно приготовить его самому, при чемъ kilo его обходится не дороже 35 коп., а гомогенизирующая способность и получаемые результаты не уступаютъ таковымъ же заграничнаго антиформина.
Вотъ рецептъ, которымъ я пользуюсь при его изготовленіи:
1) 188,0 calcariae hypochlorosae, освобожденной отъ большихъ кусковъ, взбалтывается съ 400 к. с. дестиллированной воды;
2) 250,0 natri carbonici depurati crystallisati растворяется (для ускоренія при легкомъ нагрѣваніи) въ 600 к. с. воды;
3) оба реактива смѣшиваются вмѣстѣ; первоначально получается такая густая масса, что ее трудно взбалтывать; это явленіе скоро проходитъ, смѣсь въ теченіи 3— 5 мпп. энергично взбалтывается и оставляется на 8— 10 ч. въ покоѣ (лучше въ прохладномъ и затемненномъ мѣстѣ);
4) по истеченіи указаннаго срока полученный растворъ хлориноваго натра путемъ фильтрованія отдѣляется отъ осадка углекислой извести; фильтратъ провѣряется на присутствіе хлористаго кальція путемъ приливанія нѣсколькихъ капель фильтрата къ раствору соды (выпадаетъ углекислая известь); путемъ опыта (съ небольшими количествами фильтрата отъ 25—50 к. с.) не трудно установить нужное недостающее количество соды для полнаго перевода хлористаго кальція въ углекислую известь;
5) къ профильтрованной и освобожденной отъ хлористаго кальція лабарраковой водѣ прибавляется natrium causticuin depuratum in bacillis въ количествѣ 10,0 на 100 к. с. раствора хлориноваго натра ¹).
По раствореніи натра получается желтовато-зеленоватая жидкость съ запахомъ свѣже-приготовленной щелочи и хлора, обладающая, какъ уже сказано, тѣми же свойствами, что и продажный заграничный антиформинъ.
Послѣдній для цѣлей медицинскихъ изслѣдованій впервые былъ предложенъ цроф. Uhlenliuth’oMb въ 1908 году. По предложенному имъ методу мокрота обработывается 15—20% растворомъ антиформина до полной ея гомогенизаціи, энергично центрифугируется (не мѣнѣе "/2 часа при 5000 оборотахъ въ 1'), полученный осадокъ промывается 2—3 раза физіологическимъ растворомъ соли, и изъ него обычнымъ путемъ приготовляется препаратъ для изслѣдованія. Но не смотря на пониженіе уд. вѣса антиформиноваго раствора мокроты водой или спиртомъ выпаденіе осадка получается неполное, и мутные антиформиновые растворы при центрифугированіи не просвѣтляются. При работѣ безъ центрифуги результаты получаются нѣсколько хуже, и долго приходится ждать выпаденія осадка, не менѣе 1—2 сутокъ.
Мнѣ удалось выработать новую комбинацію этого метода съ эѳиро-ацетоновою смѣсью, главное преимущество которой (комбинаціи) состоитъ въ томъ, что 1) работа происходитъ безъ центрифуги, 2) на все производство изслѣдованія тратится не болѣе 10 — 15 мин. времени и 3), что самое главное, получаемые результаты нисколько не уступаютъ, а по моимъ изслѣдованіямъ, даже превышаютъ результаты, получаемые по методу Uhlenhuth’a. Такъ изъ произведенныхъ мною (со счетомъ) 60 сравнительныхъ изслѣдованій въ 39 случаяхъ результаты получались выше ко предложенному мною способу, въ 8 были одинаковыми и лишь въ 13 результаты съ центрифугированіемъ были нѣсколько выше, чѣмъ съ эѳироацетоновою смѣсью.
Изслѣдованіе ведется въ такомъ порядкѣ:
1) Изслѣдуемая мокрота при постоянномъ взбалтываніи гомогенизируется въ теченіи 5 мин. чистымъ антиформиномъ, количество котораго берется различное въ зависимости отъ консистенціи мокроты; если послѣдняя носитъ густой, гнойный характеръ, антиформина берется столько же, сколько и мокроты; при слизистой мокротѣ—половинное; какъ показываютъ контрольныя изслѣдованія пяти-минутной гомогенизаціи вполнѣ достаточно не только для растворенія мокроты, но и громаднаго большинства некислотоупорныхъ бактерій.
2) Затѣмъ гомогенный растворъ мокроты разбавляется дестиллированной водой съ такимъ разсчетомъ, что на каждый затраченный кубикъ антиформина приливается 10 кубиковъ воды; къ полученному раствору (можно, конечно, и къ части его) приливается смѣсь ацетона съ эѳиромъ аа въ количествѣ равномъ количеству затраченной воды; все взбалтывается 2 — 3 раза въ теченіи 2—3 секундъ въ дѣлительной воронкѣ, съ притертой пробкой сверху (изслѣдованіе можно произвести въ любомъ сосудѣ) и оставляется въ покоѣ. Черезъ нѣсколько секундъ начинается раздѣленіе жидкости на 3 слоя, и просвѣтлѣніе ранѣе мутнаго растора. Туберкулезныя бактеріи и нерастворившіеся остатки мокроты содержатся въ среднемъ слоѣ, изъ котораго и берется нужное для изслѣдованія количество матеріала. Отдѣливъ нижній свѣтлый слой раствора отъ средняго путемъ открыванія крана и промывъ задержанный въ воронкѣ средній слой эѳиромъ, при дальнѣйшей работѣ поступаютъ различно въ зависимости отъ количества полученнаго матеріала: если его мало, то его собираютъ тонкой пипеткой и переносятъ на предметное стекло, если много, то путемъ осторожнаго повертыванія крана, выпускаютъ нужное количество на предметное стекло, равномѣрно распредѣляютъ, сушатъ, фиксируютъ и красятъ. Матеріалъ на столько хорошо прикрѣпляется къ стеклу, что свободно выдерживаетъ всевозможныя манипуляціи при обработкѣ. Для полученія хорошихъ результатовъ необходимо придерживаться вышеописанныхъ указаній, такъ какъ скорое и совершенное раздѣленіе на 3 слоя при взбалтываніи съ эфиро-ацетоновой смѣсью получается лишь въ томъ случаѣ, если ѵ/0 содержаніе аптиформина въ ростворахъ не превышаетъ 7—8%.
При работѣ съ другими патологическими продуктами (серозными эксудатами, гнойными, асцитическими жидкостями, мочей и пр., за исключеніемъ крови) количество антиформина можно прибавлять съ такимъ разсчетомъ, чтобы % его содержаніе было не меньше 25—30%, гомогенизировать лучше дольше, не менѣе часа. При послѣдующемъ же разбавленіи водой опять таки нужно слѣдить за тѣмъ, чтобы при прибавленіи указанной смѣси % содержаніе антиформина не превышало указанныхъ цифръ. При обработкѣ крови антиформиномъ обычнымъ путемъ гомогенизація ея идетъ крайне медленно, долго и несовершенно, получается такое обильное количество матеріала, что изслѣдованіе становится затруднительнымъ и ненадежнымъ. Зависитъ это отъ того, что антиформинъ даетъ съ гемоглобиномъ нерастворимое соединеніи.
При работѣ съ кровью я поступаю такимъ образомъ, что съ помощью слабаго раствора соляной кислоты гемоглобинъ перевожу въ солянокислое его соединеніе—гематинъ, который, давая съ антиформиномъ растворимое соединеніе, не мѣшаетъ его растворяющему дѣйствію. Все изслѣдованіе я веду такимъ образомъ, что 2 к. с. крови, взятой изъ вены локтевого сгиба, вливаю въ 10 к. с. 1% раствора соляной кислоты и черезъ короткій промежутокъ времени (2—3 м.) къ этимъ 12 к. с. приливаю 10 к. с. чистаго антиформива, гомогенизирую, также какъ и при работѣ съ мокротой, въ теченіи 5 минутъ, приливаю 100 к. с. стерилизованной дестиллированной воды (все изслѣдованіе веду вь стерильной посудѣ), встряхиваю съ 60—80 к. с. эѳиро-ацетоновой смѣси, оставляю на 2 — 3 мин. въ покоѣ ит. д. При такомъ способѣ обработки крови изъ указаннаго ея количеста получается иногда такое скудное количество матеріала (который приходится брать тонкой пипеткой), что его едва хватаетъ на приготовленіе одного препарата.
Примѣняя означенный способъ я произвелъ изслѣдованіе крови у 100 лицъ съ цѣлью провѣрить сообщеніе Rosenbergera о нахожденіи бугорчатковыхъ палочекъ въ крови во всѣхъ періодахъ болѣзни и при какой угодно формѣ бугорчатки. Въ 20 случаяхъ результатъ изслѣдованія получился отрицательный: часть изъ подвергшихся изслѣдованію лицъ никакихъ указаній на туберкулезъ не имѣла, часть имѣла заболѣванія, никакой связи съ нимъ не имѣющія, и въ остальномъ небольшомъ числѣ случаевъ больные по результатамъ изслѣдованія крови должны были считаться не туберкулезными больными. 15 лицъ имѣли lupus vulgaris faciei, и у нихъ у всѣхъ были обнаружены въ крови кислотоупорныя палочки, красящіяся какъ по способу Ziehl-Neelsen’a съ послѣдующимъ подкрашиваніемъ фона слабымъ водно-спиртовымъ растворомъ метиленовой синьки, такъ и по нѣскольку видоизмѣненному мною способу Gram’a для обнаруженія зернистыхъ формъ, описанныхъ Мuch’омъ. Красящій растворъ для этой цѣли приготовляется слѣ­ дующимъ образомъ:
1) Gentian-violett — 1,0
2) Acidi corbolici liquef. — 6,0
3) Glycerini puri — 35,0
4) Aq. destillatae — 65,0^*)
При работѣ на 1 ч. краски берется 3—4 ч. воды; растворъ фильтруется; имъ можно пользоваться для повторнаго окрашиванія.
При работѣ на 1 ч. краски берется 3—4 ч. воды; растворъ фильтруется; имъ можно пользоваться для повторнаго окрашиванія.
Ходъ окраски таковъ:
1) окраска препарата въ теченіи 3/4—1 ч.
2) основательная промывка водой,
3) обработка растворомъ Lugol’a въ теч. 15—20 сек.,
4) обезцвѣчиваніе смѣсью ацетона со спиртомъ (аа),
5) вторичная промывка водой,
6) подкраска фона В°ДНрастворомъ сафранина въ теченіи 2—3 сек. и
7) промывка водой съ послѣдующимъ высушиваніемъ препарата.
Въ остальныхъ 65 случаевъ изслѣдуемыя лица или имѣли клинически опредѣленную бугорчатку легкихъ съ одновременнымъ обнаруженіемъ палочекъ въ выдѣляемой мокротѣ, или были только подозрительны па бугорчатку, или, наконецъ, имѣли заболѣванія лимфатическихъ железъ того же характера.
На основаніи изложеннаго я считаю возможнымъ сдѣлать слѣдующіе основные выводы:
1) антиформинъ, приготовленный по вышеуказанному рецепту, по своему дѣйствію и по получаемымъ результатамъ не уступаютъ заграничному, и можетъ его по указаннымъ причинамъ вполнѣ замѣнить;
2) приготовленіе такого антиформина легко, доступно каждому, дешево (не дороже 35 к. за kilo), при соблюденіи указанныхъ условій неудачи при его изготовленіи быть не можетъ;
3) эѳирно-ацетоновая комбинація антиформиноваго метода имѣетъ преимущество передъ методомъ Uhlenhuth’a въ томъ, что она не требуетъ совершенно примѣненія центрифуги, скоро выполнимо и даетъ тѣ же, если не лучшіе, результаты,
4) предлагаемый мною способъ изслѣдованія крови такъ же простъ, скоръ, какъ и изслѣдованіе мокроты, и даетъ возможность работать при небольшихъ количествахъ взятой крови;
5) во всѣхъ случаяхъ клинически распознаннаго туберкулеза легкихъ во всѣхъ стадіяхъ болѣзни въ крови больныхъ обнаруживается присутствіе туберкулезныхъ бактерій;
6) обнаруживается онѣ и въ подозрительныхъ на бугорчатку заболѣваніяхъ,
7) каковымъ фактомъ и можно, повидимому, воспользоваться какъ діагностическимъ признакомъ въ затруднинительныхъ случаяхъ при постановкѣ діагноза.
Послѣднія два положенія требуютъ дальнѣйшей провѣрки и при томъ на большомъ числѣ наблюденій.

* Ауторефератъ изъ докладовъ въ засѣданіяхъ Общества врачей ири Императорскомъ Казанскомъ Университетѣ 31 января, 27 марта и 29 апрѣля 1910 г.
1. Химическіе продукты, за исклмченіеъ хлориновой извести, брались фирмы Gehe.
* 1 и 2 растирается въ ступкѣ; къ смѣси прибавляется 3, размѣшивается и добавляется 4; фильтровать ио нужно, красящій растворъ сохраняется долго, не разлагаясь.