Microvesicles and neutrophil aggression factors in the pathogenesis of chronic periodontitis

Cover Page


Cite item

Full Text

Abstract

Background. It is known that the number of polymorphonuclear leukocytes increases with the development of periodontitis. However, their role in the pathogenesis of chronic periodontitis has not been fully defined.

Aim. To study the pathogenetic role of polymorphonuclear leukocytes in the development of chronic periodontitis, realized by microvesicles and aggression factors (metalloproteinases, myeloperoxidase, calprotectin, lipocaine 2).

Material and methods. 30 patients aged 30 to 50 years with a diagnosis of “chronic generalized periodontitis of moderate severity (K05.3)” and no severe somatic pathology were under observation. The comparison group included 20 people with no inflammatory diseases in the oral cavity, comparable with the main group in terms of gender, age, nationality, and the presence of bad habits. Using a standard set of indices, the state of periodontal tissues was assessed, and all examined patients underwent X-ray examination. In the oral fluid of the examined, the total number of microvesicles and their phenotype, the concentration of matrix metalloproteinases-2 and -9, myeloperoxidase, calprotectin, lipocaine 2 were determined. The parameters were determined using a flow cytometer. Descriptive statistics are represented by the median and interquartile range (25th and 75th percentiles). Two independent sample sets were compared using the Mann–Whitney test. Correlation analysis was carried out according to the Spearman method.

Results. The total number of microvesicles in the oral fluid in patients with chronic periodontitis was 11 times higher than in healthy volunteers (p=0.00001). More than a third of them had neutrophil markers. The levels of neutrophil aggression factors were also higher in patients with periodontitis and correlated with the value of the periodontal index, the depth of the periodontal pocket, bleeding index, indicators of periodontal health. Thus, a strong positive relationship was found between the total number of microvesicles and the value of the periodontal index (r=0.675), the depth of the periodontal pocket (r=0.763), the bleeding index (r=0.704); the number of neutrophilic microvesicles and indicators of periodontal health — r=0.816, r=0.837 and r=0.776, respectively. The content of metalloproteinase-2 correlated with the depth of the periodontal pocket (r=0.754), bleeding index (r=0.811), papillary-marginal-alveolar index (r=0.675).

Conclusion. Neutrophils contribute to the pathogenesis of chronic periodontitis through the secretion of aggression factors: metalloproteinases, myeloperoxidase, calprotectin, lipocaine 2, and microvesicles.

Full Text

Актуальность

Ткани полости рта постоянно подвергаются различным видам повреждений — механическим (при приёме пищи), микробиологическим (при проникновении патогенных бактерий, грибов, вирусов). В здоровых тканях полости рта существует баланс между симбиотическими бактериями и клетками врождённого иммунитета, в первую очередь нейтрофилами. Когда этот баланс нарушается, развивается воспалительный процесс [1].

При недостаточном количестве нейтрофилов снижается сдерживающий эффект иммунной системы ротовой полости. Однако если ответ нейтрофилов будет чрезмерным, это также (за счёт увеличения вторичной альтерации) приведёт к воспалительному процессу в пародонте, проявляющемуся развитием хронического воспалительного заболевания — пародонтита, сопровождающемуся разрушением опорных тканей зуба, пародонта, альвеолярной кости и, как следствие этого, потерей зубов [2]. В тяжёлых случаях это увеличивает риск развития атеросклероза [3], ревматоидного артрита [4], сахарного диабета [5] и др. [6, 7].

В ходе развития данного патологического процесса циркулирующие нейтрофилы быстро мобилизуются в очаг инфекции или воспаления путём трансмиграции [2].

Этот процесс начинается с экспрессии рецепторов адгезии (E- и P-селектины) эндотелиальными клетками. Затем нейтрофилы должны проактивироваться хемокинами, что позволяет усилить их сродство к интегринам и обеспечить прочную адгезию полиморфноядерных лейкоцитов с эндотелиоцитами, служащую необходимым условием для трансмиграции [8]. Этот процесс в основном регулируется гетеродимерными рецепторами, образованными или субъединицей α (CD11), или общей субъединицей β (CD18). Данные рецепторы взаимодействуют с лигандами адгезии, такими как молекула межклеточной адгезии-1 и -2 на эндотелиальных клетках [9].

Нейтрофилы оснащены различными антимикробными механизмами, которые помогают им бороться с широким спектром микроорганизмов. Эти реакции включают фагоцитоз, активацию окислительного стресса, дегрануляцию и формирование нейтрофильных внеклеточных ловушек [10].

Показано, что количество полиморфноядерных лейкоцитов возрастает в ротовой жидкости при развитии заболевания [11]. Однако их роль в патогенезе хронического пародонтита до конца не ясна, что и определяет актуальность настоящего исследования.

Цель

Целью нашей работы было исследование патогенетической роли полиморфноядерных лейкоцитов в развитии хронического пародонтита, реализуемой микровезикулами и факторами агрессии (металлопротеиназами, миелопероксидазой, кальпротектином, липокаином 2).

Материал и методы исследования

Исследование проведено с февраля 2021 г. по февраль 2022 г. на базе ФГБОУ ВО «Читинская государственная медицинская академия» Минздрава России (г. Чита).

Под наблюдением находились 30 пациентов с диагнозом «хронический генерализованный пародонтит средней степени тяжести» и отсутствием тяжёлой соматической патологии в среднем возрасте 35,00 (32,50; 40,00) лет. Длительность заболевания составляла 5,2 (4,2; 6,2) года (р=0,00001).

В группу сравнения были включены 20 человек в возрасте 38,00 (34,30; 44,00) лет с отсутствием воспалительных заболеваний в полости рта, сопоставимых с основной группой по полу, возрасту, национальной принадлежности, наличию вредных привычек (р=0,261).

На проведение исследования получено разрешение локального этического комитета при ФГБОУ ВО «Читинская государственная медицинская академия» (протокол №107 от 27.01.2021).

В группе больных хроническим пародонтитом выявлен низкий индекс гигиены полости рта: в группе контроля он составлял 0,50 (0,20; 0,86) ед., в то время как в обследуемой группе — 1,90 (1,58; 2,40) ед. (р=0,0001).

С помощью стандартного набора индексов, таких как индекс кровоточивости Мюллеманна, папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс, пародонтальный индекс Рассела, степень гигиены полости рта, было оценено состояние тканей пародонта.

Кроме того, всем обследуемым однократно было проведено рентгенологическое исследование.

Забор ротовой жидкости обследуемых проводили натощак с 8 до 9 ч утра в контейнеры Salivette (Германия). Обследуемый в течение 3 мин пережёвывал тампон из контейнера, который затем, возвратив в контейнер, центрифугировали 5 мин при 3000 об./мин. Далее отбирали супернатант и вновь центрифугировали при 22 000 об./мин уже в течение 45 мин [12]. Осадок, содержащий микровезикулы, перемешивали и окрашивали комбинацией моноклональных антител.

Пробы для проведения изотипического контроля готовили, используя антитела типа IgG1 (иммуноглобулины G1). Количественный и качественный анализ микровезикул [общее количество микровезикул и везикул, несущих антигены лейкоцитов (CD45+), моноцитов (CD14+), нейтрофилов (CD11b+) и молекул активации (CD66b+)] проводили на проточном цитофлуориметре Cytomics FC500 (Beckman Coulter, США).

Также в ротовой жидкости определяли концентрацию биологически активных веществ, образуемых нейтрофилами: матриксных металлопротеиназ-2 и -9, миелопероксидазы, кальпротектина MRPg8/14, липокаина 2 NGAL, используя наборы для мультиплексного анализа Human Vascular Inflammation Panel 1 (Biole­gend, США). Ротовую жидкость для проведения анализа не разводили. Определение показателей осуществляли с помощью проточного цитофлуориметра Cytomics FC500 (Beckman Coulter, США).

Описательная статистика представлена медианой и межквартильным интервалом (25-го и 75-го процентилей). Сравнение двух независимых выборочных совокупностей осуществлено с применением критерия Манна–Уитни. Корреляционный анализ проведён по методу Спирмена.

Результаты и обсуждение

Пациенты, включённые в исследование, предъявляли жалобы, характерные для хронического пародонтита: в большинстве случаев отмечали появление крови на зубной щётке во время чистки зубов (78,5%), болевые ощущения при ежедневных гигиенических процедурах в полости рта (57,3%). Пятая часть пациентов не имели жалоб.

При объективном осмотре выявлены наличие гиперемии десневого края, кровоточивости при зондировании десневой бороздки, пародонтальных карманов, рецессии десны и патологической подвижности зубов (табл. 1).

 

Таблица 1. Объективные показатели состояния полости рта у больных хроническим пародонтитом

Показатели

Группа контроля,

n=20

Больные пародонтитом,

n=30

р

Индекс кровоточивости, степень

0,00 (0,00; 0,00)

2,30 (2,10; 2,80)

0,0001

ПMA, баллы

0,00 (0,00; 0,00)

40,60 (30,85; 50,00)

0,000001

Рецессия десны, мм

0,00 (0,00; 0,00)

1,39 (1,26; 1,53)

0,0001

Пародонтальный индекс, баллы

0,00 (0,00; 0,00)

3,50 (1,98; 3,85)

0,0001

Степень гигиены полости рта, баллы

0,38 (0,15; 0,51)

3,02 (2,86; 3,30)

0,0001

Глубина пародонтального кармана, мм

2,00 (2,00; 3,00)

6,10 (4,40; 6,60)

0,0001

Примечание: р — уровень статистической значимости различий по сравнению с группой контроля, данные представлены в виде Ме (Q25; Q75); ПMA — папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс.

 

Показателем активности клеток служит количество микровезикул, необходимых для обеспечения информационных потоков в тканях. Общее число микровезикул у больных хроническим пародонтитом возрастало более чем в 11 раз (табл. 2; 0,000001), причём в  большей степени за счёт микровезикул лейкоцитарного происхождения. Так, у здоровых микровезикулы, образованные всеми лейкоцитами, составляли 29,5%, при воспалении пародонта — 41,15%, при этом более трети из них были образованы нейтрофилами. Около 56% нейтрофильных микровезикул имели маркёр CD11b, что свидетельствовало о формировании прочной адгезии нейтрофилов к эндотелию сосудов и их активной миграции в повреждён­ные ­ткани.

 

Таблица 2. Качественные и количественные характеристики микровезикул ротовой жидкости у больных ­хроническим пародонтитом

Показатели

Группа контроля,

n=20

Больные пародонтитом,

n=30

р

Общее количество микровезикул в 1 мкл ротовой жидкости, абс.

1309 (956; 1764)

15 240 (12 987; 19 356)

0,000001

Число лейкоцитарных микровезикул (несущих CD45+) в 1 мкл, абс.

387 (302; 426)

6271 (5999; 6654)

0,000001

Число микровезикул, образованных ­нейтрофилами (CD45CD66b) в 1 мкл, абс.

45 (29; 55)

1995 (1754; 2109)

0,000001

Общее число микровезикул, имеющих маркёр CD11b в 1 мкл, абс.

95 (75; 92)

2287 (2086; 2596)

0,000001

Число микровезикул CD11bCD66b в 1 мкл, абс.

20 (15; 31)

1115 (1078; 1169)

0,000001

Примечание: р — уровень статистической значимости различий по сравнению с группой контроля, данные представлены в виде Ме (Q25; Q75).

 

При изучении уровня факторов агрессии нейтрофилов нами выявлен его рост у больных пародонтитом. Минимальное увеличение показателя было зафиксировано у миелопероксидазы — её концентрация в ротовой жидкости у больных пародонтитом возрастала в 2,1 раза, а максимальное — у металлопротеиназы-2: её уровень повышался в 24,8 раза (0,0001) (табл. 3).

 

Таблица 3. Факторы агрессии нейтрофилов в ротовой жидкости больных хроническим пародонтитом

Показатели

Группа контроля,

n=20

Больные пародонтитом,

n=30

р

Кальпротектин MRPg8/14, пг/мл

15,89 (8,90; 19,05)

62,37 (47,98; 104,56)

0,00002

Липокаин 2 NGAL, пг/мл

1,90 (1,40; 2,40)

7,90 (7,30; 8,40)

0,0001

Матриксная металлопротеиназа-2, пг/мл

0,17 (0,10; 0,22)

4,21 (3,41; 4,72)

0,0001

Матриксная металлопротеиназа-9, пг/мл

11,02 (5,03; 14,99)

58,05 (54,87; 61,24)

0,00004

Миелопероксидаза, нг/мг белка

28,45 (17,86; 33,61)

58,21 (57,04; 60,98)

0,0001

Примечание: р — уровень статистической значимости различий по сравнению с группой контроля, данные представлены в виде Ме (Q25; Q75).

 

При проведении корреляционного анализа показателей больных хроническим пародонтитом была обнаружена сильная положительная связь между общим количеством микровезикул и величиной пародонтального индекса (r=0,675), глубиной пародонтального кармана (r=0,763), индексом кровоточивости (r=0,704); количеством нейтрофильных микровезикул и показателями здоровья пародонта — r=0,816, r=0,837 и r=0,776 соответственно.

Объективные показатели состояния полости рта исследуемой группы имели также сильную положительную связь с факторами агрессии полиморфноядерных лейкоцитов. Так, например, содержание металлопротеиназы-2 соотносилось с глубиной пародонтального кармана (r=0,754), индексом кровоточивости (r=0,811), папиллярно-маргинально-альвеолярным индексом (r=0,675); показатель миелопероксидазы — с теми же параметрами (r=0,721, r=0,689 и r=0,799 соответственно), как и концентрация кальпротектина (r=0,654, r=0,743 и r=0,901 соответственно).

Основным причинным фактором пародонтита считают колонизацию биоплёнки ротовой полости условно-патогенными бактериями. Предполагают, что P. gingivalis — основной возбудитель пародонтита [13]. Показано, что для развития пародонтита одних оральных бактерий недостаточно. Клиническая картина пародонтита — результат увеличенной воспалительной реакции организма в ответ на бактериальную нагрузку, которая и приводит к повреждению пародонта [14].

Нейтрофилы бывают наиболее распространёнными лейкоцитами в пародонтальных карманах, десневой щели и воспалённых тканях пародонта. В здоровых тканях пародонта нейтрофилы в основном находятся в соединительном эпителии и десневой жидкости, они необходимы для поддержания симбиоза между бактериальным сообществом и макроорганизмом [15].

Fine и соавт. (2016) обнаружили три подгруппы нейтрофилов полости рта: покоящиеся/наивные циркуляторные, паравоспалительные и провоспалительные [16]. Они сообщили, что паравоспалительные нейтрофилы бывают основным подмножеством в здоровой полости рта, а провоспалительные нейтрофилы — у пациентов с пародонтитом. По сравнению с паравоспалительными нейтрофилами провоспалительные полиморфноядерные лейкоциты демонстрируют повышенный уровень фагоцитоза, дегрануляции, синтеза активных форм кислорода и образования внеклеточных ловушек. Нейтрофилы при пародонтите также имеют более высокую цитокиновую реактивность [17].

Повышение активности лейкоцитов полости рта физиологически оправдано, так как бактерии используют различные механизмы ускользания от иммунного ответа (ингибирование рекрутирования, избегание фагоцитоза, противодействие эффектам системы комплемента, нейтрализация иммуноглобулинов A и сопротивление продуктам дегрануляции нейтрофилов, в том числе и активным формам кислорода) [18]. Однако активность иммунного ответа может иметь и отрицательные последствия для организма, поскольку цитокины и антимикробные компоненты, продуцируемые в процессе элиминации патогена, такие как интерлейкины-17, -6, -1β, фактор некроза опухоли α, активные формы кислорода и нейтрофильные внеклеточные ловушки, могут вызывать резорбцию костей и повреждение мягких тканей [19, 20].

Подводя итог нашему исследованию, можно предположить следующую патогенетическую роль нейтрофилов в патогенезе хронического пародонтита. Из литературных источников известно, что инициатором воспаления пародонта становится развитие патогенной микрофлоры [13]. Этому способствуют такие факторы развития заболевания, как курение, сахарный диабет, возраст, пол и т.д. [5, 6].

Инициация и прогрессирование пародонтита зависят от дисбиотических изменений в микробиоме в ответ на появление питательных веществ из продуктов воспаления дёсен и распада тканей, а также антибактериальных механизмов, с помощью которых организм пытается снизить микробную нагрузку в области десневой борозды после начала воспаления [3]. Реакцией организма на повреждение становится активация врождённого звена иммунной системы, где одним из основных защитников служит нейтрофил.

В ходе развития воспалительного процесса происходит увеличение количества нейтрофилов и интенсивности их миграции в десневую щель. Высвобождение ими протеолитических и коллагенолитических ферментов, а также активных форм кислорода в тканях пародонта приводит к потере волокон маргинальной периодонтальной связки, апикальной миграции соединительного эпителия, что способствует апикальному распространению бактериальной биоплёнки вдоль поверхности корня и ещё большему воспалению.

Полиморфноядерные лейкоциты посредством образования микровезикул, несущих, с одной стороны, факторы агрессии, направленные на элиминацию патогена, а с другой — хемокины, индуцирующие рекрутирование клеток и врождённого и адаптивного звеньев иммунитета, вызывают увеличение вторичной альтерации и пролонгацию воспаления.

Интенсивная борьба нейтрофилов с патогенной микрофлорой приводит к появлению неоантигенов в очаге повреждения и запуску аутоиммунного компонента воспалительного процесса [21]. Кроме этого, активированные нейтрофилы могут индуцировать остеокластическую резорбцию кости путём экспрессии ключевого остеокластогенного цитокина — связанного с мембраной рецепторного активатора лиганда ядерного фактора-κВ [17]. В итоге формируется самоподдерживающийся воспалительный процесс, развивается хроническое воспаление, приводящее к разрушению тканей пародонта.

Вывод

Нейтрофилы усиливают патогенез хронического пародонтита за счёт секреции факторов агрессии: металлопротеиназ, миелопероксидазы, кальпротектина, липокаина 2 и микровезикул.

 

Участие авторов. А.А.Ф. — концепция и дизайн исследования, сбор и обработка материала, написание текста; Н.Н.Ц. — концепция и дизайн исследования, редактирование, утверждение окончательного варианта статьи; Е.В.Ф. — сбор и обработка материала, статистическая обработка данных, ответственность за целостность всех частей статьи.
Источник финансирования. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов по представленной статье.

×

About the authors

Alexander A. Fefelov

Regional dental clinic

Author for correspondence.
Email: thedantists@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-1272-5610

M.D., Regional Dental Polyclinic; PhD Stud., Depart. of Pathological Physio­logy

Russian Federation, Chita, Russia

Namzhil N. Tsybikov

Chita State Medical Academy

Email: thybikov@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0975-2351

M.D., D. Sci. (Med.), Prof., Head of Depart., Depart. of Pathological Physiology

Russian Federation, Chita, Russia

Elena V. Fefelova

Chita State Medical Academy

Email: fefelova.elena@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0724-0352

M.D., D. Sci. (Med.), Prof., Depart. of Pathological Physiology

Russian Federation, Chita, Russia

References

  1. Kibalina IV, Fefelova EV, Tsybikov NN. Dual role of neutrophilic granulocytes in the pathogenesis of atopic dermatitis. Zabaykalskiy meditsinskiy vestnik. 2020;(4):71–75. (In Russ.) doi: 10.52485/19986173_2020_4_71.
  2. Kourtzelis I, Mitroulis I, von Renesse J, Hajishengallis G, Chavakis T. From leukocyte recruitment to resolution of inflammation: The cardinal role of integrins. J Leukoc Biol. 2017;102(3):677–683. doi: 10.1189/jlb.3MR0117-024R.
  3. Czerniuk MR, Surma S, Romańczyk M, Nowak JM, Wojtowicz A, Filipiak KJ. Unexpected relationships: Periodontal diseases: Atherosclerosis-PLAQUE Destabilization? From the teeth to a coronary event. Biology (Basel). 2022;11(2):272. doi: 10.3390/biology11020272.
  4. Rivera MF, Lee JY, Aneja M, Goswami V, Liu L, Velsko IM, Chukkapalli SS, Bhattacharyya I, Chen H, Lucas AR, Kesavalu LN. Polymicrobial infection with major periodontal pathogens induced periodontal disease and aortic atherosclerosis in hyperlipidemic ApoE(null) mice. PLoS One. 2013;8(2):e57178. doi: 10.1371/journal.pone.0057178.
  5. Poryadin GV, Zakhvatov AN, Parshina AYu. Pathogenetic relationship of immunological disorders in chronic generalized periodontitis and rheumatoid arthritis. The Russian Archives of Internal Medicine. 2022;12(3):203–211. (In Russ.) doi: 10.20514/2226-6704-2022-12-3-203-211.
  6. Daniel R, Gokulanathan S, Shanmugasundaram N, Lakshmigandhan M, Kavin T. Diabetes and periodontal disease. J Pharm Bioallied Sci. 2012;4:S280–S282. doi: 10.4103/0975-7406.100251.
  7. Borgnakke WS. Does treatment of periodontal disease influence systemic disease? Dent Clin North Am. 2015;59:885–917. doi: 10.1016/j.cden.2015.06.007.
  8. Lamster IB, Pagan M. Periodontal disease and the metabolic syndrome. Int Dent J. 2017;67(2):67–77. doi: 10.1111/idj.12264.
  9. Lin WC, Fessler MB. Regulatory mechanisms of neutrophil migration from the circulation to the airspace. Cell Mol Life Sci. 2021;78(9):4095–4124. doi: 10.1007/s00018-021-03768-z.
  10. Fefelova EV. Changes of adhesive features of leucocytes under influence of hyperhomocysteinemia. Byulleten Vostochno-Sibirskogo nauchnogo tsentra Sibirskogo otdeleniya Rossiyskoy akademii meditsinskikh nauk. 2010;(3):267–269. (In Russ.)
  11. Jiang Q, Zhao Y, Shui Y, Zhou X, Cheng L, Ren B, Chen Z, Li M. Interactions between neutrophils and periodontal pathogens in late-onset periodontitis. Front Cell Infect Microbiol. 2021;11:627328. doi: 10.3389/fcimb.2021.627328.
  12. Fedorenko EV, Fefelov AA. Determination of microvesicles in oral fluid collected with the “SALIVETTE” system in patients with chronic periodontitis and gingivitis. In: Meditsina zavtrashnego dnya. Materialy XVIII mezhregional'noy nauchno-prakticheskoy konferentsii studentov i molodykh uchyonykh. (Medicine of Tomorrow. Materials of the XVIII interregional scientific-practical conference of students and young scientists.) Collection of scientific papers. Chita: RIC CHGMA; 2019. р. 287–288. (In Russ.)
  13. Mudrov VP, Davydova NV, Mishina TE, Kazakov SP. Local cellular immune response in chronic periodontitis. Medical immunology (Russia). 2021;23(6):1389–1394. (In Russ.) doi: 10.15789/1563-0625-LCI-2377.
  14. Hajishengallis G. Periodontitis: From microbial immune subversion to systemic inflammation. Nat Rev Immunol. 2015;15(1):30–44. doi: 10.1038/nri3785.
  15. Hajishengallis G. Immunomicrobial pathogenesis of periodontitis: keystones, pathobionts, and host response. Trends Immunol. 2014a;35 (1):3–11. doi: 10.1016/j.it.2013.09.001.
  16. Uriarte SM, Edmisson JS, Jimenez-Flores E. Human neutrophils and oral microbiota: A constant tug-of-war between a harmonious and a discordant coexistence. Immunol Rev. 2016;273(1):282–298. doi: 10.1111/imr.12451.
  17. Fine N, Hassanpour S, Borenstein A, Sima C, Oveisi M, Scholey J, Cherney D, Glogauer M. Distinct oral neutrophil subsets define health and periodontal disease states. J Dent Res. 2016;95(8):931–938. doi: 10.1177/0022034516645564.
  18. Lakschevitz FS, Aboodi GM, Glogauer M. Oral neutrophil transcriptome changes result in a pro-survival phenotype in periodontal diseases. PLoS One. 2013;8(7):e68983. doi: 10.1371/journal.pone.0068983.
  19. Ramadan DE, Hariyani N, Indrawati R, Ridwan RD, Diyatri I. Cytokines and chemokines in periodontitis. Eur J Dent. 2020;14(3):483–495. doi: 10.1055/s-0040-1712718.
  20. White PC, Chicca IJ, Cooper PR, Milward MR, Chapple IL. Neutrophil extracellular traps in periodontitis: A web of intrigue. J Dent Res. 2016;95(1):26–34. doi: 10.1177/0022034515609097.
  21. Tsybikov NN, Baranov SV, Kuznik BI, Malezhik LP, Isakova NV. Serum, oral and gingival fluid levels of heat shock protein-70, cytokines and their autoantibodies by periodontal disease. Stomatologiya. 2014;93(1):16–18. (In Russ.)

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download

© 2023 Eco-Vector