Цитохимические показатели лейкоцитов периферической крови новорожденных, обусловленные особенностями внутриутробного развития

Аннотация

В ряде работ показано, что в лейкоцитах крови у новорожденных с гипоксией вначале активность некоторых ферментов повышается, а по мере истощения компенсаторных возможностей организма — снижается. Характер эмбрио- и фетопатий в решающей мере определяется гипоксией различной этиологии, возникающей у плода на разных стадиях внутриутробного развития. В этом отношении роль гипоксии мало чем отличается от повреждающего действия других факторов внешней среды (ионизирующая радиация, внутриутробная инфекция, химические агенты и др.).

Полный текст

В ряде работ показано, что в лейкоцитах крови у новорожденных с гипоксией вначале активность некоторых ферментов повышается, а по мере истощения компенсаторных возможностей организма — снижается [2, 5, 6]. Характер эмбрио- и фетопатий в решающей мере определяется гипоксией различной этиологии, возникающей у плода на разных стадиях внутриутробного развития [4]. В этом отношении роль гипоксии мало чем отличается от повреждающего действия других факторов внешней среды (ионизирующая радиация, внутриутробная инфекция, химические агенты и др.).

Однако нет единого мнения о характере изменений цитохимических реакций лейкоцитов в крови новорожденных, матери которых испытывают неблагоприятное влияние окружающей среды до беременности и во время ее [1, 3]. В связи с этим мы изучали содержание нуклеиновых кислот, гликогена, кислой и щелочной фосфатаз в нейтрофилах периферической крови у новорожденных первого дня жизни, матери которых работают в зоне постоянного воздействия малых концентраций предельных и непредельных углеводородов, содержащихся в воздухе. Кроме того, было обследовано 152 доношенных новорожденных. Матери 34 из них не испытывали воздействия химических факторов, их дети вошли в контрольную группу.

ДНК в нейтрофилах крови определяли методом Паппенхейма [7], гликоген — ШИК-реакцией, кислую и щелочную фосфатазы — методом азосочетания с α-нафтилфосфатом в кислой и щелочной среде. Подсчитывали показатель активных клеток в процентах и средний коэффициент интенсивности окрашивания (R), выраженный в условных единицах (баллах), а также средний уровень субстрата в популяции (% • R). При сравнении групп было исключено влияние на цитохимические показатели таких факторов, как возраст матери, патология течения беременности и родов, травмы, болезни плода и новорожденного.

Результаты показали, что у детей основной группы количество палочкоядерных нейтрофилов, давших окрашивание на ДНК (74,1 ± 3,5%), не отличается от контроля (77,1 ± 7,1%; Р > 0,05) и не меняется с увеличением продолжительности работы матери. В то же время среднее содержание гранул в клетке у детей основной группы более низкое (19,3 ± 0,4 усл. ед.), чем в контроле (22,4 ± 1,0 усл. ед.; Р < 0,05), становится еще ниже начиная с третьего года работы матери (17,8 ± 0,4 усл. ед.; P < 0,05).

Среднее содержание гранул в сегментоядерных нейтрофилах крови у детей основной группы (21,7 ± 0,1 усл. ед.) также ниже, чем в контрольной (23,2 ± 0,1 усл. ед.; Р < 0,05), начиная с первого года воздействия углеводородов на мать. В некоторой степени это компенсируется увеличением количества активных клеток до 93,3 dz 0,6% по сравнению с контролем (89,8 ± 0,1%; P < 0,05), однако в целом средний уровень нуклеопротеидов у детей основной группы остается все же ниже.

Содержание гликогена по числу ШИК-положительных палочкоядерных (85,1 ± 4,3) и сегментоядерных нейтрофилов (97,1 ± 0,3) у детей основной группы ниже, чем в контрольной (соответственно 97,1 ± 2,5; 98,6 ± 0,3%; P < 0,05). Средний коэффициент интенсивности окрашивания палочкоядерных (1,5 ± 0,1 усл. ед.) и сегментоядерных нейтрофилов (2,1 ± 0,01 усл. ед.) также ниже, чем в контроле (2,2 ± 0,1 и 2,5 ± 0,01 усл. ед.; Р < 0,01).

Следует отметить, что снижение числа ШИК-положительных клеток и среднего коэффициента интенсивности окрашивания происходит параллельно с увеличением стажа работы матери, причем в более молодых клетках — палочкоядерных нейтрофилах — уже в первый год. Количество ШИК-положительных сегментоядерных нейтрофилов в первые 5 лет работы матери сохраняется на уровне контрольной группы (98,7 ± 0,4%) и только в дальнейшем снижается до 95,0 ± 0,7% (Р < 0,01); значительно уменьшается и средний коэффициент интенсивности окрашивания ( 1,9 ± 0.01 усл. ед.; Р < 0,001). Таким образом, снижение уровня гликогена, отмеченное в популяции нейтрофилов уже в первый год работы матери, в сегментоядерных усугубляется еще больше после 5 лет стажа.

При адаптации плода к гипоксии мобилизуются резервные возможности: учащается сердцебиение, возрастает активность пероксидазы и одновременно резко снижается содержание гликогена в нейтрофильных лейкоцитах, что свидетельствует о нарушении возможности использовать анаэробный тип энергетического обмена [5]. Из акушерской практики известно, что наиболее частой причиной цитохимических сдвигов может быть хроническая гипоксия различного генеза. Полученные данные дают основание полагать, что при работе матери в зоне воздействия малых концентраций предельных и непредельных углеводородов плод испытывает хроническую гипоксию, которая нарастает со стажем работы матери.

Количество палочкоядерных нейтрофилов, содержащих фосфатазу (46,4 ± 5,4%), и средний коэффициент интенсивности окрашивания (2,1 ± 0,1 усл. ед.) у детей основной группы не отличаются от контрольной, а число активных сегментоядерных нейтрофилов (62,4 ± 1,0%) и средний коэффициент интенсивности окрашивания (2,2 ± 0,01 усл. ед.) более низкие (соответственно 73,2 ± 1,5%; Р < 0,001 и 2,2 ± 0,02 усл. ед.; Р < 0,05). Активность фермента изменяется с увеличением продолжительности стажа матери. В первые три года контакта с предельными и непредельными углеводородами наблюдается уменьшение субстрата (2,2 ± 0,3 усл. ед.) и числа активных клеток (52,7 ± 1,9%; P < 0,01). После трех лет работы средний коэффициент интенсивности окрашивания восстанавливается (2,3 ± 0,01 усл. ед.; Р < 0,05) и даже превышает показатель контрольной группы, но количество активных клеток не достигает такового в контроле (68,1 ± 1,3%; Р < 0,05), поэтому ферментативная активность в данной популяции клеток остается пониженной.

Активность кислой фосфатазы по коэффициенту интенсивности окрашивания палочко- (2,1 ± 0,1 усл. ед.) и сегментоядерных нейтрофилов (2,2 ± 0,01 усл. ед.) у детей основной группы выше, чем в контрольной (1,5 ± 0,1 и 2,0 ± 0,01 усл. ед.; 0,001), а число активных сегментоядерных нейтрофилов в основной группе меньше (76,8 ± 0,8%), чем в контрольной (83,1 ± 0,9; P 0,001); средний уровень субстрата в популяции одинаков.

Выявляемость кислой фосфатазы в нейтрофилах изменяется с увеличением продолжительности стажа матери. В первые два года нарастает коэффициент интенсивности окрашивания при неизмененном количестве активных клеток, что приводит к увеличению субстрата в популяции. На третий год работы резко увеличивается содержание фермента, но уменьшается количество активных клеток (палочкоядерных — 33,3 ± 7,3%, сегментоядерных — 62,2 ± 3,1%), что влечет за собой уменьшение субстрата в популяции клеток.

После трех лет стажа коэффициент интенсивности окрашивания палочкоядерных нейтрофилов выше, чем в контроле; увеличивается число активных клеток (73,9 ± 5,3%), поэтому выявляемость фермента в популяции клеток оказывается более высокой, чем в контрольной группе. В сегментоядерных нейтрофилах коэффициент интенсивности окрашивания, число активных клеток и среднее содержание фермента в популяции приближаются к данным контроля.

Полученные результаты показывают, что при длительном контакте матери с малыми концентрациями предельных и непредельных углеводородов происходит угнетение синтеза ДНК, снижение утилизации гликогена, активности щелочной фосфатазы и повышение активности кислой в нейтрофилах крови новорожденных. Уровень того или иного субстрата в популяции нейтрофилов крови обеспечивается количеством активных клеток и содержанием его в отдельной клетке. При этом морфофункциональные изменения не имеют стабильного прогрессирующего характера, а могут усиливаться или ослабевать с увеличением продолжительности неблагоприятного действия факторов внешней среды и влиять на уровень только палочко- или сегментоядерных нейтрофилов либо одновременно на оба вида клеток.