Determination of controversial paternity by means of the polimerasic chain reaction and examination of polymorphic alleles locuses

T. Kh. Faizov; Фаизов Т. Х.; N. M. Medvedeva; Медведева Н. М.; E. E. Kotlyarevskaya; Котляревская Е. Е.; M. V. Perelman; Перельман М. В.; D. A. Chistyakov; Чистяков Д. А.; V. V. Nosikov; Носиков В. В.; A. M. Alimov; Алимов А. М.

doi:10.17816/kazmj90271

Определение спорного отцовства при помощи полимеразной цепной реакции и экспертизы локусов полиморфных аллелей

Авторы: Фаизов Т.Х.¹, Медведева Н.М.¹, Котляревская Е.Е.¹, Перельман М.В.¹, Чистяков Д.А.¹, Носиков В.В.¹, Алимов А.М.¹
Учреждения:
1. Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы Министерства здравоохранения Татарстана
Выпуск: Том 75, № 4 (1994)
Страницы: 298-301
Раздел: Теоретическая и клиническая медицина
Статья получена: 13.12.2021
Статья одобрена: 13.12.2021
Статья опубликована: 15.07.1994
URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/90271
DOI: https://doi.org/10.17816/kazmj90271
ID: 90271

Цитировать

Полный текст

Аннотация
Полный текст
Об авторах
Список литературы
Дополнительные файлы
Статистика

Аннотация

Судебно-медицинская экспертиза спорного отцовства, материнства и замены детей основана на определении генетически детерминированного порядка наследования групповых антигенов многочисленных и весьма разнообразных эритроцитарных (изосерологических), сывороточных, ферментных и лейкоцитарных систем крови. Как известно, исследования групповых факторов крови в делах о спорном отцовстве и материнстве позволяют в настоящее время лишь исключить ответчика, фигурирующего в гражданском процессе в качестве возможного отца или матери ребенка. Вероятность такого исключения во многом зависит от количества исследованных групповых антигенов крови у всех заинтересованных в деле лиц: матери, ребенка и предполагаемого отца. Современный уровень развития серологии теоретически позволяет производить относительно полное исключение мужчин, ложно указанных в качестве отца ребенка. Однако на практике такая возможность значительно ниже и во многом определяется количеством систем (эритроцитарных, сывороточных, ферментных и лейкоцитарных), по которым экспертное учреждение может типировать групповую характеристику проходящих по делу лиц.

Ключевые слова

Казанский медицинский архив

Полный текст

В последние годы проводятся интенсивные исследования хромосомального ДНК человека [1, 2, 3]. На основе анализа гипервариабельности минисателлитных локусов в геноме человека делаются попытки диагностики наследственных заболеваний [4, 5]. Первоначальные исследования по определению спорного отцовства или дифференциации индивидуумов были проведены с помощью метода геномной «дактилоскопии» [6, 7], основанного на детекции гипервариабельных участков ДНК генома человека при помощи ДНК-зонда из бактериофага МІЗ. Эти минисателлитные ДНК разбросаны по всему геному человека и строго специфичны для каждого индивидуума. Однако этот метод является довольно сложным и трудоемким. Несколько лет тому назад была разработана реакция амплификации различных участков ДНК человека и других живых организмов [8, 9]. При амплифицировании определенных участков гена и использовании комплементарных к ним олигонуклеотидов (праймеров) можно химически тиражировать локусы ДНК, то есть получить большое количество фрагментов ДНК, наследуемых ребенком от родителей.

Применяя достижения в области проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР), а также опыт бюро Главной судебно-медицинской экспертизы МЗ России, мы исследовали семьи на предмет определения спорного отцовства. Для этого использовали ПЦР, типируя геномную ДНК человека по пяти гипервариабельным локусам, расположенным, на хромосомах 2 (ароВ), 17 (JNZ 22), 14 (HVR-JgH), 1 (рМСТ 118) и 1 (p33.6). Амплификацию проводили на термоциклере РНС-2 (Англия). Амплифицированные фрагменты ДНК разделяли в пятипроцентном полиакриламидном геле и окрашивали серебром. Полученные результаты анализа приведены на рис. 1, 2 и в таблице.

Рис. 1. Электрофореграмма ПЦР-амплификатов генов pYZN 22, ароВ ,и HVR-JgH. AluI — маркер молекулярной массы.

Рис. 2. Электрофореграмма ПЦР-амплификаторов генов p33.6 и рМСТ118. AluI — маркер молекулярной массы фрагментов ДНК. М — мать, Р — ребенок, О — отец.

Характеристика гипервариабельных районов генома человека

Гипервариабельный район	Отец			Ребенок		Мать
ароВ (генотип по номерам аллелей)	5—12			5—8		7—8
Размер данных аллелей *	661	871		661	751	721			751
Частота встречаемости аллелей	0,358	0,05		0,358	0,004	0,088			0,004
PYNZ (генотип по номерам аллелей)	2—12			9—12		6—9
Размер данных аллелей *	240		940	730	940	520			730
Частота встречаемости аллелей	0,092		0,004	0,079	0,004	0,067			0,079
HVR-IgH (генотип по номерам аллелей)	3—3			3—9		1—9
Размер данных аллелей *	570		570	570	870	470				870
Частота встречаемости аллелей	0,387		0,387	0,387	0,062	0,121				0,062
рМСТ 118 (генотип по номерам аллелей)	1—3			1—3		1—3
Размер данных аллелей *	432		462	430	462	430		462
Частота встречаемости аллелей	0,300		0,025	0,300	0,025	0,300		0,025
p33.6 (генотип по номерам аллелей)	6—9			6—9		6—9
Размер данных аллелей *	563		674	563	674	563	674
Частота встречаемости аллелей	0,379		0,221	0,379	0,221	0,379	0,221

* пары нуклеотидов

Как следует из представленных данных, нуллифицированные участки генома отца (О) и матери (М) находятся на различных уровнях (pYNZ22, ароВ, HVR-JgH), а две последние наследуются независимо (рМСТ 118 и p33.6). Амплифицированные участки ДНК ребенка (Р) располагаются на уровне полос отца и матери. Это свидетельствует о том, что один участок гена ребенок унаследовал от отца, а другой — от матери. Уже первоначальный анализ расположения полос на электрофореграмме, перекрывание полос ребенка полосами отца и матери свидетельствует об их родстве.

Частота встречаемости индивида, который может передать набор аллелей, полученных ребенком от предполагаемого отца, составляет:

Ро = Р (ароВ/алл.5) × Р (pYNZ22/алл.12) × Р (HVR — JgH/алл.3) × Р (рМСТ118/алл.4) × Р (p33.6/алл.2). Р (рМСТ118) = Р (алл.1) + Р (алл.3) = 0,3+0,025=0,325,

Р (p33.6) =Р (алл.6) +Р (алл.9) = 0,379+0,221=0,6,

Ро = 0,004 × 0,387 × 0,358 × 0,325 × 0,6 = 0,000108.

Вероятность того, что данный мужчина является отцом данного ребенка, составляет: Рр = (1—Ро), где n=1, Рр= 1—0,000108 = 0,9999 или 99,99%.

Таким образом, метод полимеразной цепной реакции при использовании праймеров, комплементарных к гипервариабельным локусам генома человека, позволяет с высокой степенью достоверности определить истинное отцовство. Основа метода состоит в гипервариабельности генома человека, высокий уровень полиморфизма этих минисателлитных последовательностей дает возможность картировать геном и идентифицировать локусы, специфичные для каждого индивидуума.