Активация репаративной регенерации печени под влиянием сочетанной трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток и звёздчатых клеток печени

Полный текст

Актуальность. Физиологическая регенерация в печени осуществляется с низкой скоростью. В норме в печени только 0,0012–0,01% гепатоцитов вступает в митоз. При патологии печени скорость клеточного обновления в печени возрастает в тысячи раз [1].

Пролиферация клеток начинается в перипортальной области. Образующиеся гепатоциты мигрируют по печёночным трабекулам по направлению к центральным венам. После резекции происходит гипертрофия оставшейся ткани печени [2, 3].

В восстановлении массы оставшихся после операции сегментов печени принимает участие два типа клеток — гепатоциты и клетки-предшественники. В качестве одного из кандидатов на роль клеток-предшественников гепатоцитов рассматривают звёздчатые клетки печени (ЗКП; клетки печени Ито, перисинусоидальные клетки печени) [4].

ЗКП — непаренхиматозные клетки, выполняющие следующие функции: осуществляют депонирование витамина А, обеспечивают ремоделирование внеклеточного матрикса, участвуют в регуляции синусоидального микроциркуляторного русла, синтезируют факторы роста (фактор роста гепатоцитов, фактор роста эндотелия сосудов, эпидермальный фактор роста, трансформирующий фактор роста) [5]. Ряд авторов указывают на возможность дифференцировки ЗКП в гепатоциты и холангиоциты, что даёт основание считать их стволовыми клетками печени [4, 6].

Учитывая биологические свойства ЗКП, представляется перспективным их использование для активации регенерации печени после частичной гепатэктомии. Проведение аллогенной трансплантации этих клеток может сопровождаться развитием иммунологических конфликтов [7]. Этого можно избежать путём проведения сочетанной трансплантации ЗКП вместе с мультипотентными мезенхимальными стромальными клетками (ММСК), которые, обладают иммуносупрессивными свойствами [8, 9]. Кроме того, доказана способность ММСК через паракринный механизм, путём формирования межклеточных контактов, через слияние с гепатоцитами активировать репаративную регенерацию печени [10, 11].

Цель настоящего исследования — изучение влияния сочетанной трансплантации ММСК и ЗКП на активацию репаративной регенерации печени после частичной гепатэктомии.

Материал и методы исследования. Эксперименты выполнены на 56 белых беспородных мышах-самцах в возрасте 7–8 мес, c массой тела 25–27 г. Опыты, уход и содержание животных осуществляли в соответствии с Директивой №63 от 22 сентября 2010 г. Президиума и Парламента Европы «О защите животных, используемых для научных исследований» и приказом Минздрава РФ №267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики».

Проведение исследований одобрено локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, протокол №8 от 20.10.2017.

Источником ММСК служил хорион плаценты 5 лабораторных животных мышей-самок в возрасте 3–4 мес, срок гестации 18 дней. Мононуклеарную фракцию клеток получали путём последовательной механической и ферментативной (раствор аккутазы; Millipore, США) обработки ткани плаценты. Выделение ЗКП осуществляли методом коллагеназно-проназной перфузии печени с последующим разделением клеток в градиенте плотности гистоденза. Культивирование ММСК проводили в условиях СО2-инкубатора (Termo Scientific, США) при температуре 37 °C с содержанием углекислого газа 5% и влажности 90%. Для трансплантации лабораторным животным использовали ММСК третьего пассажа. Введение ЗКП проводили непосредственно после выделения клеток [12].

Иммунофенотипирование суспензии ММСК проводили методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител, конъюгированных с флюорохромами (Becton Dickinson, США). Во фракции трансплантируемых клеток оценивали содержание ММСК с иммунофенотипом положительных по CD105 (Rat IgG2A Anti-Mouse Endoglin/CD105-Fluorescein Clone 209701, RTU), CD29 (Rat IgG2A Anti-Mouse Integrin beta 1/CD29-PE Clone 265917), Sca-1 (Rat IgG2A Anti-Mouse Sca1-APC Clone 177228) и отрицательных по CD45 (Rat IgG2B Anti-Mouse CD45-PerCP Clone 30-F11; Becton Dickinson, США) на проточном цитометре Beckman Coulter Navios с помощью набора Mouse Mesenchymal Stem CellMulti-Color Flow Cytometry Kit (Bio-Techne, США). Количество жизнеспособных клеток с фенотипом CD45-CD105+Sca1+CD29+ составило 93%.

Функциональные свойства ММСК оценивали по их дифференцировке в адипоцитарном и остеогенном направлениях. Состав среды, индуцирующей дифференцировку в остеогенном направлении: MesenCult™ Osteogenic Stimulatory Supplement (StemCell Technologies, Канада); в адипоцитарном направлении: MesenCult™ Adipogenic Stimulatory Supplement (StemCell Technologies, Канада) и MesenCult™ MSC Basal Medium (Mouse) (StemCell Technologies, Канада) в соотношении 1:4, 2 ммоль раствора L-глутамина (StemCell Technologies, Канада).

Наличие остеогенной дифференцировки подтверждали гистохимическим методом по увеличению экспрессии щелочной фосфатазы (ЩФ), а также окраской по von Kossa, выявляющей наличие минерализованного фосфата кальция. Дифференциацию в адипоцитарном направлении подтверждали гистохимическим методом окраской липидных вакуолей красителем Oil Red O.

Идентификацию ЗКП проводили на проточном цитометре по оценке эндогенной ретиноидной флюоресценции. Жизнеспособность клеток перед трансплантацией определяли красителем 7-AAD (7-Aminoactinomycin D), она составила 95–97%.

Мышей разделили на четыре группы: контрольная, опытная 1 (введение ММСК), опытная 2 (котрансплантация ММСК и ЗКП), группа сравнения (мыши без частичной гепатэктомии, которым вводили 0,9% раствор NaCl — 0,2 мл).

В каждой группе было по 14 животных. Контрольной и опытным группам проводили частичную гепатэктомию по методу C. Mit­chell и H. Willenbring. Для анестезии использовали золетил 10 мг/кг (Virbac, Франция) [13]. Выведение животных из эксперимента проводили на 3-и и 7-е сутки после операции цервикальной дислокацией (табл. 1).

 

Таблица 1. Распределение животных по группам

Время выведения из эксперимента	Контрольная группа	Опытная группа 1 (ММСК)	Опытная группа 2 (ММСК+ЗКП)	Группа сравнения
3-и сутки	7 мышей	7 мышей	7 мышей	7 мышей
7-е сутки	7 мышей	7 мышей	7 мышей	7 мышей

Примечание: ММСК — мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки; ЗКП — звёздчатые клетки печени.

 

Мышам опытных групп вводили клетки в латеральную хвостовую вену: ММСК — в дозе 4 млн клеток/кг (120 тыс. клеток/мышь), ЗКП — в количестве 9 млн клеток/кг (270 тыс. клеток/мышь), суспендированных в 0,2 мл 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы вводили 0,9% раствор NaCl — 0,2 мл в латеральную хвостовую вену. Группу сравнения составили мыши без частичной гепатэктомии, которым вводили 0,9% раствор NaCl — 0,2 мл.

На 3-и и 7-е сутки после введения клеток исследовали морфометрию печени и биохимические показатели сыворотки крови. Для оценки морфометрических показателей печени изготавливали гистологические срезы толщиной 3–5 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином. Для морфометрического анализа данных использовали компьютерную программу анализа изображений (Biovision, Россия). Анализировали следующие показатели: количество гепатоцитов на 1 мм2, площадь гепатоцитов, площадь ядра гепатоцита, площадь цитоплазмы гепатоцита, ядерно-цитоплазматический индекс, количество двуядерных гепатоцитов на 1 мм2, митотический индекс.

Для оценки апоптоза использовали набор первичных [Caspase-3 Antibody (L-18) goat polyclonal IgG, 1:100; Santa Cruz Biotech, USA] и вторичных (donkey anti-goat IgG-FITC, 1:100; Santa Cruz Biotech, USA) антител на гистологических срезах по идентификации эффекторной каспазы-3. Величину запрограммированной гибели гепатоцитов определяли расчётом апоптотического индекса.

Микроядерный тест проводили после механической и ферментативной обработки [проназа Е, коллагеназа I типа и ДНК-аза (Sigma)] клеток печени и окраски 2,5% ацетоорсеином с докрашиванием цитоплазмы клеток 1% спиртовым раствором светлого зелёного [14].

Для оценки выраженности репаративных процессов в клетках печени анализировали количество поли-АДФ-рибозаполимера, являющегося продуктом реакции поли-АДФ-рибозилирования, определяя первичные [Anti-Poly (ADP-Ribose) Polymer antibody, abcam] и вторичные [Rabbit Anti-Chicken IgY H&L (FITC)] антитела на проточном цитометре. Рассчитывали среднюю интенсивность флюоресценции популяции клеток, характеризующую экспрессию антигенов (плотность рецепторов) внутри клетки [15].

Биохимические показатели сыворотки крови [альбумин, аспартатаминотрансфераза (АСТ), аланинаминотрансфераза (АЛТ), ЩФ] определяли кинетическими методиками с использованием анализатора Chem Well 2910 (Combi) и реагентов Ольвекс Диагностикум, Россия.

С помощью набора HGF Mouse ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay; Abcam) методом иммуноферментного анализа осуществлялось количественное измерение фактора роста гепатоцитов в сыворотке крови.

Исходные данные имели нормальное распределение. Для проверки нормальности распределения был использован критерий Шапиро–Уилка. Достоверность различий в сравниваемых выборках определяли с применением t-критерия Стьюдента. Данные представлены в виде среднего арифметического значения (M) и стандартного отклонения (SD). Статистическая обработка данных проведена с помощью программного пакета SPSS Statistics (версия 17,0).

Результаты. При оценке морфометрических показателей печени на 3-и сутки после частичной гепатэктомии у животных после введения ММСК и ЗКП обнаружено увеличение массы печени на 20,2% (p=0,005) по сравнению с контрольной группой. Восстановление её массы сопровождалось повышением митотической активности гепатоцитов на 23,8% (p=0,016), снижением запрограммированной клеточной гибели на 27,7% (p=0,022), а также повышением количества двуядерных гепатоцитов на 26,8% (p=0,008), увеличением площади ядра гепатоцитов на 25,5% (p=0,011) и ядерно-цитоплазматического индекса на 24,9% (p=0,003).

На 3-и сутки после трансплантации ММСК животным с частичной гепатэктомией не выявлено изменения морфометрических показателей печени относительно контрольной груп-
пы (табл. 2).

 

Таблица 2. Морфометрическая характеристика репаративных процессов в печени мышей на 3-и сутки после частичной гепатэктомии

Показатели	NaCl (группа сравнения)	NaCl + частичная гепатэктомия (контрольная группа)	ММСК + частичная гепатэктомия (опытная группа 1)	ММСК + ЗКП + частичная гепатэктомия (опытная группа 2)
Масса печени, г	1,81±0,15	1,04±0,091	1,11±0,101	1,25±0,101,2
Апоптотический индекс, ‰	0,43±0,04	2,13±0,201	1,96±0,191	1,54±0,151,2
Количество гепатоцитов с микроядрами, ‰	2,21±0,18	3,37±0,261	3,07±0,231	2,97±0,201
Митотический индекс, ‰	0,74±0,06	8,1±0,601	7,91±0,581	10,03±0,751,2
Количество гепатоцитов, на 1 мкм2	1525,57±101,06	1206,72±91,961	1167,86±93,551	1160,0±113,141
Площадь гепатоцита, мкм2	267,53±6,39	331,81±24,021	343,71±22,611	333,43±18,201
Площадь цитоплазмы гепатоцита, мкм22	219,14±7,12	243,64±19,25	237,63±15,94	249,14±9,84
Площадь ядра гепатоцита, мкм2	48,40±3,57	67,13±7,011	67,89±6,91	84,29±8,611,2
Ядерно-цитоплазматический индекс	0,22±0,02	0,27±0,011	0,29±0,011	0,34±0,021,2
Количество двуядерных гепатоцитов, на 1 мм2	234,43±9,92	380,97±10,15 1	386,71±21,391	484,0±35,711,2

Примечание: 1p <0,05 с группой сравнения; 2p <0,05 с контрольной группой; ММСК — мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки; ЗКП — звёздчатые клетки печени.

 

На 7-е сутки после введения ММСК у мышей с частичной гепатэктомией установлено увеличение массы печени, которое достигалось за счёт повышения митотической активности гепатоцитов, ингибирования апоптоза, увеличения количества двуядерных гепатоцитов, повышения площади ядра.

В то же время при проведении котрансплантации ММСК и ЗКП на 7-е сутки наблюдения морфометрические показатели мышей в опытной группе сохраняют изменения, обнаруженные на 3-и сутки: снижение запрограммированной клеточной гибели гепатоцитов на 28,8% (p=0,014), увеличение количества двуядерных гепатоцитов на 26,1% (p=0,006), повышение размеров ядра на 26,7% (p=0,001), возрастание ядерно-цитоплазматического индекса на 31,0% (p=0,001). Увеличение количества двуядерных гепатоцитов можно объяснить тем, что в ранние сроки репаративной регенерации значительная часть митозов ацитокинетические.

Также на 7-е сутки после частичной гепатэктомии сохраняется увеличенная митотическая активность, способствующая восстановлению массы печени. Отмечено повышение активности ферментов репарации ДНК, что ведёт к снижению количества гепатоцитов с микро­ядрами в опытных группах 1 и 2 (табл. 3).

 

Таблица 3. Морфофункциональная характеристика репаративных процессов в печени мышей на 7-е сутки после ­частичной гепатэктомии

Показатели	NaCl (группа сравнения)	NaCl + частичная гепатэктомия (контрольная группа)	ММСК + частичная гепатэктомия (опытная группа 1)	ММСК + ЗКП + частичная гепатэктомия (опытная группа 2)
Масса печени, г	1,76±0,13	1,15±0,091	1,53±0,122	1,48±0,092
Апоптотический индекс, ‰	0,39±0,03	1,25±0,091	0,94±0,071,2	0,89±0,081,2
Количество гепатоцитов с микроядрами, ‰	2,18±0,11	2,77±0,231	2,21±0,162	2,14±0,182
Митотический индекс, ‰	0,73±0,06	4,51±0,471	5,76±0,491,2	5,80±0,371,2
Активность ферментов семейства PARP в клетках печени, MFI	45,2±4,1	59,3±5,211	80,6±7,51,2	86,3±8,061,2
Количество гепатоцитов, на 1 мкм2	1538,14±103,59	1427,71±116,98	1485,14±116,20	1354,0±138,0
Площадь гепатоцита, мкм2	264,66±5,87	286,41±22,44	275,14±24,16	292,57±20,94
Площадь цитоплазмы гепатоцита, мкм2	214,21±8,10	223,03±17,97	204,37±22,80	212,21±13,88
Площадь ядра гепатоцита, мкм2	50,46±3,29	63,39±5,12 1	76,63±4,921,2	80,36±7,081,2
Ядерно-цитоплазматический индекс	0,24±0,02	0,29±0,021	0,38±0,021,2	0,38±0,021,2
Количество двуядерных гепатоцитов, на 1 мм2	237,29±8,24	320,77±10,641	393,90±23,231,2	404,71±27,471,2

Примечание: 1p <0,05 с группой сравнения; 2p <0,05 с контрольной группой; ММСК — мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки; ЗКП — звёздчатые клетки печени; MFI — средняя интенсивность флюоресценции ­популяции клеток.

 

Проведение частичной гепатэктомии сопровождается значительным повышением уровня фактора роста гепатоцитов в сыворотке крови на 3-и сутки после операции. Введение ММСК не приводит к достоверному изменению (р=0,723) этого показателя относительно группы контроля, тогда как проведение котрансплантации ММСК и ЗКП вызывает ещё большее увеличение уровня фактора роста гепатоцитов (на 32% по сравнению с данными контрольной группы; p=0,001).

На 7-е сутки после частичной гепатэктомии также отмечен эффект от введённых клеток. Содержание фактора роста гепатоцитов в опытной группе 1 было на 35% (p=0,002), в опытной группе 2 — на 57% выше по сравнению с контрольной группой (p=0,001; табл. 4).

 

Таблица 4. Содержание фактора роста гепатоцитов в сыворотке крови

Сутки после операции	NaCl (группа сравнения)	NaCl + частичная гепатэктомия (контрольная группа)	ММСК + частичная гепатэктомия (опытная группа 1)	ММСК + ЗКП + частичная гепатэктомия (опытная группа 2)
3-и	4,22±0,35	18,21±1,761	20,02±2,01	24,12±2,361,2,3
7-е	4,49±0,39	9,58±0,881	13,0±1,021,2	16,7±2,621,2,3

Примечание: 1p <0,05 с группой сравнения; 2p <0,05 с контрольной группой, 3p <0,05 с опытной группой 1; ММСК — мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки; ЗКП — звёздчатые клетки печени.

 

При анализе биохимических показателей крови на 3-и сутки в опытной группе 1 снижается активность ферментов, характеризующих цитолиз гепатоцитов (АСТ, АЛТ). В группе мышей, которым вводили ММСК и ЗКП, выявлено уменьшение активности ферментов цитолиза гепатоцитов и холестаза (ЩФ) с одновременным повышением концентрации мочевины (табл. 5).

 

Таблица 5. Биохимические показатели крови мышей на 3-и сутки после частичной гепатэктомии

Показатели	NaCl (группа сравнения)	NaCl + частичная гепатэктомия (контрольная группа)	ММСК + частичная гепатэктомия (опытная группа 1)	ММСК + ЗКП + частичная гепатэктомия (опытная группа 2)
Общий белок, г/л	68,31±3,93	50,03±4,821	55,61±4,241	53,67±4,341
Альбумин, г/л	30,84±4,25	19,80±2,511	21,60±3,141	22,01±2,041
Мочевина, ммоль/л	6,21±0,87	4,37±0,331	4,59±0,361	5,26±0,291,2
Аспартатаминотрансфераза, ед./л	97,26±8,47	209,53±13,851	158,99±14,381,2	156,97±13,351,2
Аланинаминотрансфераза, ед./л	81,13±8,66	155,24±9,381	116,73±12,511,2	114,16±13,531,2
Щелочная фосфатаза, ед./л	66,34±5,24	106,67±10,451	82,0±7,262	83,47±8,401,2
Глюкоза, ммоль/л	5,73±0,69	3,66±0,291	4,20±0,461	3,87±0,321
Общий билирубин, мкмоль/л	8,90±1,14	21,99±5,471	21,29±2,361	20,13±1,611
Фибриноген, г/л	3,27±0,18	2,27±0,261	2,11±0,181	2,67±0,221

Примечание: 1p <0,05 с подгруппой сравнения; 2p <0,05 с контрольной группой; ММСК — мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки; ЗКП — звёздчатые клетки печени.

 

На 7-е сутки после частичной гепатэктомии в опытной группе 2 повышается содержание общего белка, альбумина, при этом уровень общего белка и альбумина достигает значений группы сравнения. Также зарегистрированы повышение содержания мочевины, снижение уровня ферментов цитолиза (АСТ, АЛТ) и холестаза (ЩФ), уровень ферментов аналогичен группе сравнения. Также выявлено повышение уровня глюкозы и фибриногена. Введение ММСК не сопровождалось восстановлением белковосинтетической функции печени (табл. 6). Кроме того, выявлено повышение содержания общего белка в опытной группе 2 относительно опытной группы 1 (см. табл. 6).

 

Таблица 6. Биохимические показатели крови мышей на 7-е сутки после частичной гепатэктомии

Показатели	NaCl (группа сравнения)	NaCl + частичная гепатэктомия (контрольная группа)	ММСК + частичная гепатэктомия (опытная группа 1)	ММСК + ЗКП + частичная гепатэктомия (опытная группа 2)
Общий белок, г/л	66,46±4,36	44,27±3,621	49,63±2,801	60,27±5,092,3
Альбумин, г/л	31,41±3,38	20,59±1,901	23,13±2,321	28,06±2,162
Мочевина, ммоль/л	6,11±0,61	4,57±0,461	5,57±0,482	5,63±0,352
Аспартатаминотрансфераза, ед./л	104,56±9,07	153,86±16,961	103,57±12,422	111,21±10,012
Аланинаминотрансфераза, ед./л	89,23±4,43	137,10±16,291	86,34±7,522	95,50±8,572
Щелочная фосфатаза, ед./л	63,30±4,00	83,11±5,931	64,23±6,002	65,61±4,362
Глюкоза, ммоль/л	6,44±0,62	4,30±0,291	4,91±0,511	5,20±0,341,2
Общий билирубин, ­мкмоль/л	9,37±0,65	15,41±2,761	14,81±2,021	13,70±0,831
Фибриноген, г/л	3,20±0,23	2,20±0,231	2,83±0,202	2,87±0,242

Примечание: 1p <0,05 с подгруппой сравнения; 2p <0,05 с контрольной группой; 3p <0,05 с опытной группой 1; ММСК — мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки; ЗКП — звёздчатые клетки печени.

 

Таким образом, проведённые исследования позволили установить положительный эффект сочетанной трансплантации ММСК и ЗКП на морфофункциональное состояние печени после частичной гепатэктомии.

Обсуждение. В настоящей работе было изу­чено влияние ММСК и сочетанной трансплантации ММСК и ЗКП на восстановление морфофункциональных показателей печени после частичной гепатэктомии. Полученные данные свидетельствуют о преимуществе сочетанной трансплантации данных видов клеток при частичной гепатэктомии. Установлено, что сочетанная трансплантация ММСК и ЗКП обеспечивает повышение массы печени уже на 3-и сутки, а на 7-е сутки она ­восстанавливается до значений группы сравнения за счёт повышения митотической активности гепатоцитов и снижения запрограммированной клеточной гибели.

В литературе есть данные, свидетельствующие об эффективности трансплантации ЗКП при частичной гепатэктомии. При этом установлены механизмы участия этих клеток в активации репаративной регенерации. Авторами было показано, что эти клетки оказывают влияние путём выработки биологически активных веществ, а также путём дифференцировки в гепатоциты [4].

Полученный в настоящем исследовании положительный эффект от проведённой сочетанной трансплантации клеток можно объяснить способностью ЗКП вырабатывать фактор роста гепатоцитов, который служит мощным митогеном для гепатоцитов, способствуя активации клеточной и внутриклеточной регенерации. Выявленное изменение биохимических показателей крови [нормализация содержания ферментов цитолиза (АСТ, АЛТ) и холестаза (ЩФ)] можно объяснить способностью ММСК к выработке противовоспалительных факторов [16,  17].

Проведённые исследования также позволяют установить механизм снижения количества гепатоцитов с микроядрами, которые, как известно, отражают уровень патологических митозов. В свою очередь, уменьшение клеток с микроядрами может быть обусловлено выявленной активацией системы репарации ДНК. Ферменты репарации ДНК семейства PARP, исправляя повреждения в структуре ДНК, вызывают снижение запрограммированной клеточной гибели, уменьшают количество патологических митозов.

Выводы

1. Аллогенная сочетанная трансплантация мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, выделенных из хориона плаценты, и звёздчатых клеток печени способствует активации регенерации печени. Этот эффект проявляется в активации механизмов клеточной регенерации за счёт повышения митотической активности гепатоцитов и ингибирования запрограммированной клеточной гибели.
2. Проведение котрансплантации данных видов клеток сопровождается уменьшением количества патологических митозов, увеличением количества двуядерных гепатоцитов.
3. Проведённые исследования свидетельствуют о способности сочетанной трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных и звёздчатых клеток печени обеспечивать восстановление морфофункционального состояния печени после частичной гепатэктомии и дают основание для проведения пилотных клинических исследований.

 

Участие авторов. И.Ю.М. проводила исследование; Д.Ю.Г. отвечал за сбор и анализ результатов; А.В.О. — руководитель работы.
Источник финансирования. Исследование выполнено при финансовой поддержке государственного задания «Разработка технологии использования сочетанной трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток и звёздчатых клеток печени для активации регенерации печени в условиях её повреждения», номер регистрации 121032500021-1 от 25.03.2021.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов по представленной статье.

Об авторах

Ирина Юрьевна Маклакова

Уральский государственный медицинский университет; Институт медицинских клеточных технологий

Автор, ответственный за переписку.
Email: makliu@mail.ru
Россия, г. Екатеринбург, Россия; г. Екатеринбург, Россия;

Дмитрий Юрьевич Гребнев

Уральский государственный медицинский университет; Институт медицинских клеточных технологий

Email: makliu@mail.ru
Россия, г. Екатеринбург, Россия; г. Екатеринбург, Россия

Артур Васильевич Осипенко

Уральский государственный медицинский университет

Email: makliu@mail.ru
Россия, г. Екатеринбург, Россия

Список литературы

Дополнительные файлы