Significance of the Sachs-Witebsky cytochol reaction for serodiagnosis of syphilis

Abstract

Serology of syphilis, which has a relatively recent past (since 1907), in recent years has written into its pages a number of huge successes, which greatly facilitated the diagnosis of syphilis. Serology of syphilis owes such success to the so-called groove. flocculation reactions, the number of which is increasing every year, since despite the great successes in this area, still no other reaction has been proposed, in 100% of cases positive at different stages of syphilis and not possessing a groove. nonspecificity, i.e. the ability to give a positive result in the absence of syphilis.

Full Text

Серология сифилиса, имеющая сравнительно недавнее прошлое (с 1907 г.) в последние годы вписала в свои страницы ряд огромных успехов, значительно облегчивших диагностику сифилиса. Таким успехом серология сифилиса обязана т. паз. реакциям флокуляции, число которых с каждым годом все увеличивается, так как несмотря на большие успехи в этой области, все же до сих пор не предложено еше реакции, в 100% случаев положительной при разных стадиях сифилиса и не обладающей т. паз. неспецифичностью, т. е способностью давать положительный результат при отсутствии сифилиса.

Впервые, осадочные реакции получены Porqes и Меуег’а, которые при смешении 1% водной лецитиновой эмульсии и равной части сыворотки сифилитика получили преципитат. Вместо лецитина Porqes, Neubauer, Elias и Solomon применяли гликохолевый натрий, а Hermann и Perutz предложили с целью усиления выпадения прибавлять к гликохолевому натрию холестерин. Первой из осадочных реакции, получившей широкое практическое применение, была реакция Закс-Георги. Сущность ее заключалась в том, что, при смешивании сыворотки больного сифилисом человека и спиртового (холестенизирован- ного) экстракта из сердца животных при стоянии в термостате в течение 18—20 часов, образуются видимые простым глазом хлопья, тогда как сыворотка здорового человека таких хлопьев не дает.

Согласованность р. Закс-Георги ср. Вассермана—94%. После появления р. Закс-Георги научная мысль в области серологии сифилиса была направлена к тому, чтобы изыскать такие новые методы или переработать старые, которые ври условии наибольшей специфичности давали бы возможность в наиболее короткий срок поставить серо- диагноз сифилиса.

Реакция Кана, предложенная в 1922 г., в особенности ускоренная р. Кана, сообщенная в 1924 г. Каном и Кеймом, удовлетворяла этим требованиям. Р. Кана прочно завоевала одно из первых мест в серодиагностике сифилиса. Согласованность р. Кана с р. Вассермана—95,5%, с клиникой—99.3%.

Закс в 1928 г. в сотрудничестве с Витебским модифицировал свою первую реакцию, известную под названием р. 3акс-Георги или лептохольреакции—в ускоренную цитохольреакцию, вполне отвечающую, современным требованиям, как по простоте постановки опыта, так и по своей чувствительности. Сущность ее заключается по Финкельштейну и Аристовой в следующем; сырой экстракт для р. Закс- Георги (мышца сердца быка, провернутая через мясорубку, экстрагированная спиртом из расчета 1 : 5) выпаривается досуха в сушильное шкафу и неостывшая масса разводится 96° спиртом в количестве в Зраза меньшем взятого для выпаривания экстракта, после чего прибавляется холестерин от 0,3% до 0,6°/о.

Для исследования берутся в пробирку две части NaCl (0,9%) и туда же быстро вдувается одна часть вышеописанного антигена. Смесь, оставляется при комнатной t3 в течение 10 минут. Исследуемая инактивированная при 56° в течение получаса сыворотка берется в количестве 0,2 в узенькие Кановские пробирки; туда же наливается по 0,1 антигена. Штатив хорошо встряхивается и оставляется при комнатной температуре на Уз часа. Затем прибавляется 0,9% раствор NaCl по 1cm3. в каждую пробирку. Для контроля сыворотки употребляется вместо антигена соответствующее разведение спирта; для контроля антигена вместо сыворотки берется 0,9% NaCL Учет анализа производится тотчас же после прибавления NaCl. Регистрировать опыт рекомендуется или микроскопически, или через агглютиноскоп, или же над вогнутой поверхностью зеркала от микроскопа ¹).

По данным последней серологической конференции (Копенгаген, 1928 г.), где из реакций флокуляции ставились: р. Кана, выполненная Капом и Боасомор. помутнения Мейнике, выполненная Мейнике; р. конгломерации Мюллера, выполненная Мюллером; р. 3акс-Георги (лентохоль и цитохольреакции), выполненные Витебским; р. Сигма (модифицированная), выполненная Но рель; сифилометрическая реакция Верна, выполненная Ре бра к ом, оказалось, что в результате испытания 944 сывороток (из них 502 от сифилитиков и 435 от других больных) на первом месте по своей чувствительности стоит реакция Мюллера, давшая в группе сифилиса 63,5% позитивов и 9% сомнительных; далее—р. Кана, давшая 61,1% позитивов и 6,6% сомнительных; р. питохоль—51,2% позитивов и 4,2% I сомнительных; р. лентохоль— 41,9% позитивов и 4,6% сомнительных. Остальные реакции дали результаты, значительно уступающие вышеприведенным реакциям по чувствительности. Таким образом, по данным конференции, только две реакции—р. конгломерации Мюллера и р. Кана идут впереди р. цитохоль.

Проверяя цитохольреакцию на 3300 сыворотках Финкельштейн и Аристова нашли, что по своей чувствительности она занимает среднее место между р. Закс-Георги (лентохоль) и р. Кана,, идя впереди р. Закс-Георги и несколько уступая р. Кана.

Совпадение цитохольреакции и р. Кана в 96,4%; цитохоль р. и р. В. в 94,5%. По данным авторов, большая чувствительность р. цитохоль наблюдается по сравнению с р. В.: при первичном склерозе, при люэс, люэс лат., невролюэсе, врожденном люэсе, в случаях подозреваемого люэса, при окончании лечения.

По данным Ширвина и Алексеевой на 14203 исследованных, процент совпадения 3 реакций: р. В., р. Кана, и р. цитохоль— 94,2%; расхождение в 5,8%. Процент совпадений цитохольреакции ср. В. и р. Кана одинаков и равен 96%. По их данным, при люэс 1 цитохольреакция отстает по числу позитивов от р. В. и р. К. свыше чем в 7% случаев; при люэс II идет наравне с р. К. и впереди р. В. При люэс III акт. опережает р. В.; при невролюэсе цитохольреакция идет также значительно впереди р. В., несколько уступая р. К. При люэсе скрытом она идет впереди р. В., несколько уступая р. К. При люэс III скрытом, люэсе врожденном—цитохольр. по своей чувствительности находится на последнем месте. В группе сомнительного сифилиса цитохольр. идет впереди р. В. и р. К. Благоприятные результаты о р. цптохоль приводят Гросс и Эрлих (1500 сывороток), Клив и Энгельгардт (на 10000 сыворот.). Боровская и Орлова (на 2400 сыворотках), Блюмберг (на 8000 сывороток), П а к и Шейнман (на 1006 сыворот.).

Наш материал по проверке цитохольреакции охватывает 3250 сывороток, из них 2490 поставлены одновременно с р. В. и ускоренной р. К. и 760 опытов только параллельно с р. Кана (в условиях участковой работы.

Реакция ставилась вначале согласно технике, описанной Финкельштейном и Аристовой, но в процессе работы выявилось, что лучшие результаты получаются при разведении антигена, как для р. Кана, т. е. в одну пробирку брали 1 часть антигена, в другую 2 части 0,9% NaCl и переливали из одной пробирки в другую 7—8 раз. а затем оставляли стоять при комнатной температуре в течение 10 минут, после чего приготовленный таким образом антиген шел в опыт.

К недостаткам р. цитохоль Финкельштейн и Аристова относят непрозрачность отрицательных сывороток, в виду большей опалесценции разведенного антигена. Мы это обстоятельство учли и для облегчения регистрации предлагаем простой, но очень удобный и значительно облегчающий регистрацию способ: при регистрации результатов анализа пробирка ставится перед невооруженным или вооруженным лупой глазом и несильно несколько раз встряхивается (избегать пены) для того, чтобы можно было наблюдать, как жидкость течет по стенке пробирки. В положительных сыворотках видны хлопья, которые, как мелкие хлопья снега, стекают по стенкам пробирки, спускаясь вниз; в отрицательных сыворотках по стенкам стекает прозрачная жидкость. Особенно это хорошо заметно пр ч предварительной регистрации анализа через 5—10 минут после прибавления антигена (до приливания NaCI). Описанный способ регистрации не требует сложных приспособлений (аг- лютиноскоп, зеркало от микроскопа) и даже без особого навыка дает возможность регистрировать точно и безошибочно результаты. Из указанных выше 2490 сывороток, где нами применялась р. цитохоль параллельно с р. В. и р. Кана, случаев явного и скрытого сифилиса было 972, подозрительных по сифилису--98; больных кожными заболеваниями и Другими болезнями, а также здоровых было 1420. Кровь для исследования бралась у стационарных больных терапевтической, нервной, физиотерапевтической, гинекологической, хирургической и глазной клиник Ин-та для усовершенствования врачей, у амбулаторных больных поликлиники Института и вендиспансера, а также у работниц трудового профилактория.

По стадиям сифилиса наш материал распределяется следующим

Образом (см. таблицу):

Сравнительная таблица результатов р. цито холь (Закс-Витебского), р. К. и В.

Диагноз	Количество исследовании	Все 3 реакции положител.	Все 3 реакции отрицательные	Расхождение по 3 реакциям	и р. К. по- .; р. В. от- р. ц. дожит рицат	р. Ц. положит.; р. К. и р. В. отрицат.	и р. В. от- .; р. К. по Д’ а. рицат дожит	р. К. и р. В. положит.; р. Ц. отрицат.	р. В. и р. Ц. положит.; р. К. отрицат.	р. В. положит.; р. Ц. и р. К. от- рицат. ______	% позитивов			Полное совпадение результатов р. Ц.
											По р. В.	По р. Ц.	По р. К.
														с р. В. (в %)	с р. К. (в %)
Люэс I	42	41	—	1	1	—		—	—	—	97,85	100	100	97,85	100
Люэс II актив	102	101	—	1	1	—	—	—	—	—	99	100	100	99	100
Люэс III актив	145	117	13	15	11	----	2	—.	—	2	82	88,27	89,65	91	98,62
Люэс II скрыт	531	261	155	115	83	2	26	-----	2	2	49,9	65,53	69,68	83,61	94,36
Врожденный люэс	12	8	1	3	------	—	——	2	—	1	91,66	66,66	83,33	66,66	75
Сифилис нервной системы	75	35	36	4	—	-------	3	1	—-	—	48	46,66	52	98,66	94,66
Висцеральный люэс	65	30	32	3	3	—	——	—	—	—	46,15	50,76	50,76	95,39	100
Подозрит. по сифилису	98	75	13	10	3	5	2		—	—	76,53	84,69	81,63	91,83	94,9
Кожные больные	502	5	493	4	3	1	—		—-	—-	1	1,79	1,59	97,21	99,8
Прочие больные	918	9	886	13	9	4	—	—-	—	—	0,98	2,39	1,9	98,25	99,23

Таким образом полное совпадение всех 3 реакций в 93,22%: полное расхождение всех 8 реакций в 6,78%; совпадение р. ЦИТО с р. В. в 94,61%; совпадение р. ЦИТО с р. К. в 97,99%:

Люэс I—42 случая. В этих случаях р. ЦИТО идет наравне с р. К. и впереди р. В; процент позитивности=100.

Люэс II активный—102 случая. Из них вторичного свежего сифилиса—31 случай, вторичного рецидивного сифилиса—71 случай, р. ЦИТО идет наравне с р. К., впереди р. В. Процент позитивности=100.

Люэс III активный—145 случаев. Р. ЦИТО идет впереди р. В., несколько уступая р. Кана. Процент позитивности=88,27.

Люэс скрытый—531 случай. Р. ЦИТО также идет впереди р. В., уступая р. Кана. Процент позитивности для ЦИТО=65,53.

Врожденный сифилис—12 случаев. Р. ЦИТО здесь несколько уступает р. Кана и р. В. Процент позитивности для ЦИТО=66,66.

Сифилис нервной системы—75 случаев. Р. ЦИТО здесь несколько уступает и р. К. и р. В. Процент позитивности для ЦИТО=46,66.

Висцеральный сифилис—65 случаев. Р. ЦИТО идет наравне с р. К„ впереди р. В. Процент позитивности для р. ЦИТО—50,76.

Из 98 случаев подозрительных по сифилису (мужья, жены, дети больных сифилисом и др.). р. ЦИТО идет впереди и р. К. и р. В.

Кожные больные (волчанка, экзема, рак, мягкий шанкр и др.)— 502 случая; здесь р. В. была положительной в 5 случ., р. К. в 8 и р. ЦИТО в 9 случаях.

К группе „прочих больных“—918 случаев относится кровь больных других клиник Института с диагнозом неспецифических заболеваний. Р. В. положительная в 9 случаях, р. К. в 18 и р. ЦИТО в 22 случаях.

Всего обследовано с заболеваниями не сифилитического характера 1420 сывороток. На этом материале мы получили положительную р. В. в 14 случаях, р. К. в 26 и р. ЦИТО в 31 случае.

Процент неспецифических задержек по нашим данным для р. В.= 1%, Р- К.=1,8% р. Ц.=2,4%.

Неспецифические результаты р. ЦИТО наблюдались при экземе, мягком шанкре, ТВС кожи, язвах вульгарного характера.

Из общего числа 2490 р. полное совпадение всех 3 реакций наблюдалось в 2312 случаях: 682 положит, и 1630 отрицательных. Из разбора нашего материала видно, что р. ЦИТО в общем, несколько уступая р. К., идет впереди р. В. при люэс I, II и ІII активном, люэсе скрытом, сифилисе внутренних органов; она несколько уступает р. В. при врожденном сифилисе, сифилисе нервной системы.

При работе на участке в Елабужском районе Татреспублики по обследованию и ликвидации одного выявленного очага сифилиса выяснилось, что комплексная постановка р. К. и этой простой по своей технике реакции цитохоль—обусловили нам возможность плодотворной борьбы с эндемией.

Из 760 исследований, проделанных при этом обследовании в условиях участковой работы у 320 человек повторно исследованных с 1—1% мес. перерывом мы получили 100% совпадения р. цитохоль и р. Кана между собой и с клиникой. По стадиям сифилиса больные делятся: с люэс II свежим—2, с люэс II рецидивн.—11, с люэс III актив.—1, с люэс. III скрыт.—2. У 29 больных с люэс II скрыт.—28 имели обе р. положительными и лишь у одного получились обе р. отрицательными. «Больной принял 2 курса специфического лечения.

Из 275 чел., не болевших сифилисом, у 3 была слабо положительная р. Кана и у 2 слабо положительная р. цитохоль

Работники лаборатории знают, что осадочные реакции протекают в различных условиях анализа по разному. Это особенно относится к р. Кана, которая протекает иногда очень демонстративно, иногда же более вяло. Этим недостатком, по нашим наблюдениям, р. цитохоль страдает меньше, чем р. К а н а, вследствие чего регистрация предложенным нами способом, делает анализ более объективным.

При оценке получаемых результатов (в виду разницы их по разным методам исследования), мы руководствуемся выводами Копенгагенской серологической конференции, указывающей, что 1) несмотря на повышение чувствительности серодиагностических методов серологические результаты могут быть в некоторых случаях отрицательными при наличии сифилитической инфекции; 2) „При отсутствии сифилиса в анамнезе или сифилитических явлений положительная реакция должна приниматься, как признак сифилиса лишь при получении положительного результата при повторном анализе еще одной порции крови“; 3) „За исключением некоторых, вполне определенных патологических условий, сифилис устанавливается с большой вероятностью, почти с уверенностью, если результаты нескольких исследований, поставленных по различным методам, являются положительными“.

Отношение к слабо положительным результатам (2 + +) несколько иное: результаты нескольких, одновременно поставленных реакций, при отсутствии соответствующих клинических данных, даже при повторном получении слабо положительного результата, не должны трактоваться как специфические без связи с анамнестическими данными.

Выводы. 1) По простоте постановки, быстроте течения, по своей чувствительности р. цитохоль приближается к р. Кана.

• Совпадение ее с р. В. 94,61% с р. К. 97,99%
• По нашему опыту оказалось, что лучшие результаты получаются при разведении антигена для р. цитохоль, как для р. Кана.
• Недостаток в учете реакции, заключающийся в большей опалесценции антигена, исправляется благодаря предлагаемому нами способу регистрации результатов путем улавливания по стенкам пробирки „падающих хлопьев снега“.
• Реакция цитохоль менее, чем р. Кана, чувствительна к малейшим изменениям условий анализа.
• Комплексная постановка р. Кана и р. цитохоль является дальнейшим уточнением серологической работы в участковой обстановке при массовых обследованиях с целью диагностики скрытых форм сифилиса, позволяя вместо массовой постановки р. В. ставить осадочные реакции лишь в положительных случаях, дополняя их р. В, этим, конечно, значительно упрощается работа.

¹) Модификация, предложенная в последнее время Sachs и Wytebsk’ом (Kl. W., № 43, 1931 г.) нами поставлена еще на небольшом количестве сывороток.