Распределение антигенов гистосовместимости среди больных отосклерозом

Аннотация

Значительная распространенность отосклероза в популяции (0,1—2% среди европейцев [13], 0,2% среди населения бывшего Советского Союза [3], 8,3% у белых американцев [14]) и полиморфизм его клинических проявлений требуют разработки дополнительных методов диагностики заболевания. В литературе имеются сообщения о донозологической диагностике отосклероза путем определения риска развития заболевания при семейных его формах [6, 8, 10], однако его проведение на практике довольно затруднительно [12].

Полный текст

Информативным признаком предрасположенности к развитию широкого спектра болезней человека, в том числе и патологии среднего уха, являются группоспецифические антигены HLA — продукты генов главного комплекса гистосовместимости (ГКГ) человека [1, 5, 9]. Механизмы подобных ассоциаций во многом неизвестны, однако использование антигенов ГКГ человека в качестве маркеров широко распространенных заболеваний способно оптимизировать их диагностику, существенно влиять на раскрытие этиологии и патогенеза болезней, а также уточнять пути наследственной передачи склонности к развитию заболеваний [1, 7].

Имеется ряд разноречивых сообщений об ассоциации отосклероза с системой HLA [10, 11, 15].

Целью настоящего исследования было изучение ассоциированности отосклероза, особенностей его клинического течения, значения наследственного фактора в развитии отосклероза и степени участия HLA системы в генезе семейных и несемейных форм заболевания в популяции жителей г. Казани.

Всем больным были проведены общесоматическое клиническое обследование, полный комплекс аудиологического исследования, гистотипирование и при положительном семейном анамнезе —генеалогическое исследование с составлением родословной.

Нами исследовано распределение антигенных частот ГКГ среди 105 больных отосклерозом казанской популяции (татар — 52, русских — 53). Контрольной группой служили 113 здоровых коренных жителей г. Казани — доноров Республиканской станции переливания крови, результаты исследования которой были опубликованы ранее [2]. Фенотип ГКГ лимфоцитов, выделенных из гепаринизированной венозной крови больных отосклерозом путем седиментации в фик-кол-верографиновом градиенте плотности, определяли методом двухступенчатой микролимфоцитарной цитотоксичности [1]. Использовали панель гистотипирующих сывороток Санкт- Петербургского НИИ гематологии и переливания крови, выделяющей 9 антигенов локуса А, 17 антигенов локуса В и 5 антигенов локуса С.

Статистический анализ результатов исследования выполняли с использованием критериев Стьюдента, Фишера, Пирсона и коэффициента корреляции. Вычисляли генные частоты (р), показатели гаметной ассоциации (Д), их степень (г), вероятность ошибки (Р), ее корректированное значение (Р), а также величину комбинированного риска (RR), этиологическую (EF) и превентивную (PF) фракции [1, 4].

Исследование было двухэтапным. На первом этапе обследовано 85 больных отосклерозом. Наследственный фактор по результатам генеалогического анализа выявлен у 15,3% больных, что согласуется с литературными данными [6]. Заболевание встречалось с одинаковой частотой у больных татарской (50,6%) и русской (49,4%) национальностей, составляющих большинство коренных жителей г. Казани. Тем не менее на основании фактов маркирования некоторых заболеваний разными антигенами HLA в различных национальностях [7] на первом этапе исследований мы учитывали национальную принадлежность больных отосклерозом.

Больные были разделены на две подгруппы: 1т — 43 человека татарской национальности и 1р — 42 пациента русской национальности. Соответственно этому контрольная (2-я) группа также состояла из двух подгрупп: 2т (55 татар) и 2р (58 русских). Анализ полученных данных показал наличие значимых различий между группами больных отосклерозом и здоровых лиц в отношении антигенов А28, В18, В27, В38, В39, Вх и CWI. Частота неопределяемой аллели локуса В (Вх) в группе больных отосклерозом была выше, чем в контроле. Все остальные аллели встречались у больных отосклерозом реже. Эти тенденции были характерны как для татар, так и для русских в отношении всех антигенов, кроме В27 (последний не найден ни у одного лица татарской национальности). Степень некорректированной достоверности (Р<0,05; Р_с >0,05) была достигнута и в подгруппе русских у антигенов В40, Вх и CWI. Разница частот антигенов А28 и В38 была достоверна лишь у татар, а В18, В27 и В39 — лишь у русских. Следовательно, этнический признак не оказывает существенного влияния на формирование особенностей полиморфизма HLA больных отосклерозом. Хотя различия частот антигенов А28 и В38 более выражены у лиц татарской национальности, а антигенов В18, В27 и В38 — у русских, общие тенденции их снижения, особенно частот антигенов В40, Вх, CW1, у больных отосклерозом не зависят от национальности.

Как было показано ранее [2], популяции татар и русских, проживающих в г. Казани, достаточно близки между собой по частотному HLA-антигенному профилю. Два из трех антигенов, по содержанию которых различаются подгруппы татар и русских (А1 и A3), не участвуют в ассоциациях с отосклерозом в национальных подгруппах. Третий антиген, определяющий эту разницу,— В27, не встретился ни у одного лица татарской национальности. Это позволяет объединить этнические подгруппы больных отосклерозом и на более обширном материале проанализировать 20 HLÂ-ассоциированность клинических особенностей течения, а также специфичность их аудиологических показателей.

Достоверную ассоциацию с отосклерозом проявили несколько антигенов. В их число вошли как антигены, ассоциированные с отосклерозом в этнических подгруппах (А28, В12, В18, В27, В40, Вх, CWI), так и два «новых» — А2 и Сх. Частота антигенов В38 и В39 не отличалась от контроля в объединенной группе больных отосклерозом, что свидетельствует или о случайности их ассоциации в этнических подгруппах, или об их ассоциированности с отосклерозом только в пределах «своей» национальности: В38 — в татарской, В39 — в русской.

В локусе А антиген А2 встречался достоверно чаще (Р<0,02; RR=1,96; EF=0,253), а антиген А28 — реже (Р<0,02; RR = 0,156; PF = 5,081). Степень их ассоциированности практически одинакова, что может быть связано с псевдоассоциированностью этих антигенов с отосклерозом в связи с наличием выраженной перекрестной реактивности их между собой [1, 5]. Поэтому мы воздерживаемся от выводов о наличии или отсутствии ассоциации отосклероза с антигенами А2 и А28 до результатов дальнейших исследований (панель гистотипирующих сывороток, использованная в нашем исследовании, не имела моноспецифических антисывороток к антигену А28).

Другой аллелью HLA, более частой в группе больных отосклерозом, оказался антиген В12 (Р<0,03; RR = = 2,249; EF=0,150). При разделении больных в зависимости от формы тугоухости (тимпанальной, смешанной, кохлеарной) встречаемость антигена В12 у лиц со смешанной формой отосклероза оказалась выше, чем у лиц с остальными формами.

Неопределяемые аллели локусов В и С (Вх и Сх) наблюдались у больных отосклерозом чаще, чем в контроле (Р<0,0003; Р_с <0,004; RR = 2,44; EF=0,141 и Р<0,04; Р_с >0,5; RR = = 1,62; EF = 2,98 соответственно). Это может быть связано с повышением гомозиготности по локусу В больных отосклерозом. Число лиц с неопределяемой второй аллелью локуса В среди больных составляет 38,8%, что превышает число подобных случаев в контроле (25,7%). У 7 (8,2%) больных отосклерозом определялся фенотип В12Вх. В контроле его имели лишь 2,7 % индивидов, что свидетельствует о возможной ассоциированности отосклероза с гомозиготностью по В12, обусловленной или рецессивным характером сцепленного с В12 гена, от которого зависит предрасположенность к отосклерозу, или дозозависимым эффектом этого гена на развитие болезни.

Факт более высокой частоты Вх и Сх можно объяснить и наличием антигенов, ассоциированных с отосклерозом, определение которых было невозможно в наших исследованиях из-за отсутствия соответствующих антисывороток. На это указывает большая (9,4 %), чем в контроле (3,5%), встречаемость фенотипа ВхВх у больных отосклерозом.

Антигены В18, В27, В40, CWI наблюдались у больных отосклерозом несколько реже. Уровень корректированного значения достоверности различий среди этих антигенов был зарегистрирован у антигена В40 (Р< <0,001; Р_с <0,04; RR = 0,086; PF = = 9,643). Снижение частоты антигена В40 было известно и ранее [11]. Антиген В27 не обнаружен ни у одного японца, больного отосклерозом [15]. Факт снижения частоты антигенов В18 и CWI в группе больных отосклерозом установлен нами впервые. При обследовании больных данной категории в зависимости от форм заболевания антиген В40 был выявлен лишь при тимпанальной форме. Это свидетельствует, по нашему мнению, о не случайности снижения частоты этого антигена в общей группе больных и дает возможность предположить своеобразное «протективное» воздействие антигена В40 на развитие отосклероза.

Таким образом, представляется несомненным участие генетической системы HLA в детерминации предрасположенности к отосклерозу. Для выяснения тождественности генов постулируемым генам отосклероза [8] группа из 85 человек была разделена на две подгруппы: «наследственную» (15,3%) и «ненаследственную». В первую подгруппу вошли 13 человек со строго установленной семейной передачей болезни в нескольких поколениях. Вторую подгруппу составили больные (72), у которых семейная передача была исключена на протяжении не менее чем двух поколений (по крайней мере, доступные сведения о родственниках не подтверждали семейную природу заболевания). Оказалось, что степень ассоциированности ненаследственной формы отосклероза с антигенами практически не отличается от таковой в общей группе, а по некоторым аллелям даже превышает силу ассоциаций: это касается антигенов А2, В12 и В18, показавших большую величину достоверности ассоциации. Антигены А28 и Сх, в отличие от таковых в общей группе, не проявили ассоциированности с несемейной формой отосклероза. Больные с «семейным» отосклерозом не имели ни одного антигена со значимой разницей частот по сравнению с контролем. С целью исключить возможность отсутствия данной разницы в связи с малочисленностью этой подгруппы (второй этап исследований) мы провели дополнительное гистотипирование еще 20 лиц, страдающих отосклерозом с фамильной агрегацией. Результаты этих исследований подтвердили предположение об отсутствии HLA-ассоциированности семейных форм отосклероза: частоты антигенов объединенной подгруппы с наследственной формой отосклероза (33 чел.) практически не отличались от таковых в контрольной группе.

Анализ теоретических частот гаплотипов (гаметных ассоциаций) выявил 18 положительных и 5 отрицательных двухлокусных сочетаний аллелей HLA, встречавшихся достоверно чаще или реже ожидаемого, исходя из закона случайного распределения. Три обнаруженных гаплотипа были более характерны для всей популяции в целом (B5-CWI, B27-CWI, А10-В38), остальные — для обследованной группы.

Гаплотипы с участием локуса С наблюдались гораздо чаще. Отрицательные гаметные ассоциации антигена А2 с антигеном В18 (Д =—0,01; г =—0,12) и В38 (Д = —0,0063; г= =—0,13), между антигенами В12 и А28 (Д =—0,0038; г = —0,07) и между В12 и CWI (Д = —0,0029; г = = —0,08) свидетельствуют о вторичности отрицательной связи В18, В38, и CWI с отосклерозом, связанной с неравновесным сцеплением этих антигенов с антигенами В12 и А2. В то же время антигены В27, В39 и В40 не имеют отрицательной ассоциированности с положительно маркирующими отосклероз антигенами А2, В12 и Вх.

Согласно результатам исследований, полиморфизм антигенов HLA в группе больных отосклерозом отличается некоторыми особенностями по сравнению с контролем. Они, скорее всего, не зависят от этнической предрасположенности больных. Наиболее вероятным HLA маркером, от которого в существенной степени зависит снижение риска развития отосклероза, является антиген В40; в исследованной группе он встречался с корректированной достоверностью реже, чем в контроле. Как показал анализ гаметных ассоциаций, эта связь не определялась вторичной ассоциацией HLA—В40 с антигенами, более частыми в группе больных отосклерозом. Отрицательно ассоциировано это заболевание с антигенами В27 и В39 у лиц русской национальности. Снижение частоты HLA-A28, -В 18, -В38 и CWI, скорее всего, вторично и обусловлено их отрицательной гаметной ассоциацией с антигенами, чаще наблюдавшимися у больных отосклерозом (А2, В12, Вх). Не исключено, что появление пары антигенов локуса А, положительно (А2) и отрицательно (А28) связанных с отосклерозом, носит характер псевдоассоциации, объясняемой перекрестной реактивностью.

Повышенная встречаемость неопределяемых аллелей локуса В (Вх) у больных отосклерозом свидетельствует, по нашему мнению, об увеличении числа гомозигот. Увеличение числа носителей антигена В12 указывает на его предрасполагающую роль в возникновении отосклероза, более выраженную при гомозиготной форме. По-видимому, ген В12 или сегрегирующий с ним ген чувствительности к отосклерозу обладает дозозависимым аддитивным эффектом.

Обнаруженные в общей группе больных отосклерозом ассоциации сохранялись лишь в подгруппе с ненаследственной формой заболевания, что свидетельствует, по нашему мнению, о несоответствии гипотетического аутосомно-доминантного гена (или генов), обусловливающего развитие семейных форм отосклероза, генам системы HLA, детерминирующих устойчивость 22 или предрасположенность к развитию отосклероза при отсутствии семейного анамнеза.