Повышение антикоагулянтной и фибринолитической активности плазмы крови у крыс при использовании продуктов пантового оленеводства
- Авторы: Блажко А.А.1, Шахматов И.И.1,2, Жариков А.Ю.1,2, Киселёв В.И.1,2
-
Учреждения:
- Алтайский государственный медицинский университет
- Научно-исследовательский институт физиологии и фундаментальной медицины
- Выпуск: Том 99, № 1 (2018)
- Страницы: 64-69
- Тип: Экспериментальная медицина
- Статья получена: 06.02.2018
- Статья опубликована: 15.02.2018
- URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/7811
- DOI: https://doi.org/10.17816/KMJ2018-064
- ID: 7811
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Цель. Оценить реакции системы гемостаза у крыс при различной продолжительности приёма концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, а также исключить возможное адаптивное действие на систему гемостаза добавок (глюкозы, аскорбиновой кислоты, фруктовой эссенции), входящих в состав используемого концентрата.
Методы. В работе использованы 50 половозрелых крыс-самцов линии Wistar. Три группы экспериментальных животных по 10 крыс принимали концентрат, содержащий кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, по 4,5 мл в сутки в течение 7, 14 и 30 дней. Показатели, полученные у экспериментальных животных, сравнивали с показателями интактных крыс и контрольной группы, принимавшей только добавки, входящие в состав используемого концентрата.
Результаты. На 7-й день приёма концентрата показатели системы гемостаза не отличались от показателей интактных крыс. По истечении 14 дней приёма концентрата отмечены снижение содержания фибриногена в крови и повышение антикоагулянтной активности плазмы крови. На 30-й день приёма концентрата, помимо ранее выявленных изменений в системе гемостаза, была установлена гипокоагуляция по внутреннему пути активации плазменного гемостаза, а также повышение фибринолитической активности плазмы крови. По завершении 30-дневного приёма добавок, входящих в состав исследуемого препарата, у контрольной группы животных показатели системы гемостаза не отличались от показателей интактных крыс.
Вывод. Повышение адаптированности системы гемостаза при приёме исследуемого концентрата заключается, вероятно, в повышении антикоагулянтной и фибринолитической активности плазмы крови у крыс, а также в снижении содержания фибриногена в крови; действующим компонентом, обеспечивающим адаптивные изменения в системе гемостаза, служит комплекс биологически активных веществ, содержащихся в крови и гистолизате из репродуктивных органов марала.
Полный текст
Изучение процессов приспособления организма к изменяющимся условиям среды — актуальный вопрос современной физиологии. Система гемостаза является одной из наиболее реактивных систем организма и может участвовать в формировании как эустрессорной, так и дистрессорной реакции организма на различные факторы окружающей среды [1]. Так, авторами показано, что сверхпороговое по силе или длительности стрессорное воздействие вызывает в системе гемостаза дезадаптивные изменения. При генерализованной ответной реакции организма на дистрессорное воздействие система гемостаза универсально отвечает претромбозом: гиперкоагуляцией с признаками тромбинемии на фоне подавления антикоагулянтной и фибринолитической активности плазмы крови, что объединено общим понятием «состояние тромботической готовности» [2].
Для того чтобы избежать развития состояния тромботической готовности при дистрессорном воздействии, необходимо вести поиск путей повышения устойчивость организма и системы гемостаза. Показано, что повышения уровня адаптированности организма можно достичь как физическими тренировками, так и приёмом адаптогенов.
К адаптогенам животного происхождения относятся продукты пантового оленеводства, которые повышают умственную и физическую работоспособность [3]. Известно, что применение средств на основе пантов обеспечивает более сбалансированную работу энергообеспечивающих механизмов организма, поддерживает стабильность липидного обмена, оказывает благоприятное действие на баланс в системе «прооксиданты-антиоксиданты» [4].
Помимо антиоксидантного эффекта пептидов, выделенных из пантов марала, были изучены также гипогликемические и гиполипидемические эффекты продуктов пантового оленеводства [5]. Показано, что компоненты продуктов пантового оленеводства оказывают иммуномодулирующее действие [6], также был отмечен гемопоэтический эффект [7].
В продуктах пантового оленеводства отсутствуют запрещённые допинговые вещества или близкие к ним аналоги [8]. Причём было отмечено, что препараты, содержащие, помимо крови марала, ещё и гистолизат из половых органов самцов, обладают более выраженным тонизирующим действием за счёт повышения биосинтетической активности в клетках скелетной мускулатуры крыс [9]. Кровь марала, как и панты, содержит множество активных веществ: пептидов, гормонов, факторов роста, так, например, выделен инсулиноподобный фактор роста 1 [10]. Также было показано, что пептид sVAP32, выделенный из пантов марала, предотвращает развитие сердечного фиброза, вызванного перегрузкой давлением [11].
Ранее нами было установлено, что предварительный 30-дневный приём концентрата, содержащего кровь и гистолизат половых органов самцов марала, значительно снижает риск развития состояния тромботической готовности у крыс после сверхпороговой физической нагрузки [12]. Однако за счёт каких реакций системы гемостаза и при какой продолжительности приёма концентрата развивается максимальный адаптивный эффект — изучено не было.
Цель работы — оценить реакции системы гемостаза у крыс при различной продолжительности приёма концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, а также исключить возможное адаптивное действие на систему гемостаза добавок (глюкозы, аскорбиновой кислоты, фруктовой эссенции), входящих в состав используемого концентрата.
В качестве материала для исследования использованы 50 половозрелых крыс-самцов линии Wistar с массой тела 200–250 г:
- группа интактных животных (n=10);
- три экспериментальные группы (по 10 животных в каждой), принимавших концентрат в течение 7, 14 и 30 дней;
- группа контроля, принимавшая добавки (глюкозу, аскорбиновую кислоту, фруктовую эссенцию), входящие в состав исследуемого концентрата, в течение 30 дней (n=10).
Животных содержали в соответствии с требованиями Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (2000), Европейской конвенции «О защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных или иных научных целей» (Страсбург, 1986).
Три группы экспериментальных животных принимали концентрат, содержащий кровь и гистолизат половых органов самцов марала, выпускаемый под торговым названием «Пантогематоген (Лубяньгем)» (ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства» ФАНО России, г. Барнаул) по 4,5 мл в сутки в течение 7, 14 и 30 дней соответственно. Доза 4,5 мл в сутки для крыс с массой тела 200–250 г соответствует 30 мл в сутки для человека (c массой тела 80 кг), то есть 2 столовые ложки, что рекомендовано производителем в качестве суточной дозы. Расчёт дозы концентрата для крыс проводили с учётом коэффициентов межвидового пересчёта [13].
Экспериментальные животные содержались в индивидуальных клетках и принимали водный раствор концентрата перорально из индивидуальных поилок. Раствор приготавливали путём добавления 4,5 мл концентрата в воду, доводя раствор до общего объёма 40 мл (суточная норма потребления воды для данных крыс, выявленная нами до начала эксперимента).
Интактные животные принимали воду в том же объёме, что и экспериментальные животные. Контрольная группа животных принимала добавки (глюкозу, аскорбиновую кислоту, фруктовую эссенцию), входящие в состав исследуемого концентрата, в объёме 1,7 мл в сутки в течение 30 дней. Данный объём рассчитывали из процентного содержания компонентов концентрата: 37% — добавки (35% — глюкоза, 1% — аскорбиновая кислота, 1% — фруктовая эссенция), 31,5% — цельная кровь марала, 31,5% — гистолизат репродуктивных органов марала. Объём 1,7 мл добавок концентрата разводили водой до 4,5 мл: предполагаемое действующее вещество (кровь и гистолизат половых органов самцов марала) было заменено водой в соответствующих пропорциях.
Кровь для исследования забирали в объёме 6 мл из печёночного синуса крыс в полистироловый шприц с широкой иглой, содержащий 0,11 М (3,8%) раствор натрия цитрата (соотношение крови и цитрата 9:1), под наркозом. Использование крыс в экспериментах осуществляли в соответствии с Европейской конвенцией и директивами по охране позвоночных животных, используемых в эксперименте [14].
Параметры системы гемостаза оценивали на коагулометрах «Минилаб» (Россия) и «Trombostat-2» (Германия) с помощью диагностических наборов фирмы «Технология-Стандарт» (Россия), согласно рекомендациям З.С. Баркагана и А.П. Момота [15]. Оценка состояния системы гемостаза включала исследование сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза, внутреннего и внешнего путей активации плазменного гемостаза, конечного этапа свёртывания крови, антикоагулянтной и фибринолитической активности плазмы крови.
Индуцированную агрегацию тромбоцитов проводили на агрегометре «Биола», при этом в качестве индуктора использовали раствор аденозиндифосфата (АДФ). При исследовании агрегации тромбоцитов для возможности измерения на агрегометре богатую тромбоцитами плазму крови крыс разводили в соотношении 1:1 с «собственной» бедной тромбоцитами плазмой крови.
Поскольку полученные признаки не подчинялись нормальному распределению, статистическую значимость различий оценивали при помощи непараметрического U-критерия Манна–Уитни. Различия считали достоверными при уровне статистической значимости p <0,05.
Полученные в ходе исследования результаты представлены в таблицах в виде (m [25–75%]), где m — медиана в выборочной совокупности; [25–75%] — 25-й и 75-й перцентили.
Данные исследования состояния системы гемостаза интактных животных и трёх экспериментальных групп животных, принимавших концентрат в дозе 4,5 мл/сут в течение 7, 14 и 30 дней, представлены в табл. 1.
Таблица 1. Состояние системы гемостаза у интактных и экспериментальных животных, принимавших препарат в течение 7, 14 и 30 дней (m [25–75%])
Метод исследования | Интактные животные (n=10) | Ежедневный приём концентрата в дозе 4,5 мл/сут | ||
7 дней (n=10) | 14 дней (n=10) | 30 дней (n=10) | ||
Тромбоциты, ×109/л | 569,5 | 603,0 р=0,086 | 584,0 р=0,348 | 570,0 р=0,940 |
Индуцированная АДФ агрегация тромбоцитов, максимальные значения | 29,1 | 29,0 р=0,624 | 29,6 р=0,568 | 30,0 р=0,070 |
Силиконовое время, с | 310,0 | 300,5 р=0,133 | 310,0 р=0,653 | 329,0 р=0,903 |
АПТВ, с | 21,4 | 22,0 р=0,903 | 20,8 р=0,290 | 23,7 р=0,041 |
Протромбиновое время, с | 26,2 | 26,7 р=0,270 | 24,9 р=0,058 | 26,9 р=0,405 |
Тромбиновое время, с | 44,9 | 44,8 р=1,000 | 44,0 р=0,364 | 44,9 р=0,273 |
РФМК, мг/100 мл | 3,5 | 3,5 р=0,624 | 4,0 р=0,325 | 3,5 р=0,344 |
Содержание фибриногена, г/л | 2,2 | 2,1 р=0,391 | 1,8 р=0,016 | 1,7 р=0,010 |
Антитромбин III,% | 95,7 | 98,8 р=0,094 | 119,4 р <0,001 | 120,5 р <0,001 |
Спонтанный эуглобулиновый фибринолиз, мин | 530,0 | 562,5 р=0,347 | 570,0 р=0,064 | 470,0 р=0,017 |
Примечания: АДФ — аденозиндифосфат; АПТВ — активированное парциальное тромбопластиновое время; РФМК — растворимые фибрин-мономерные комплексы; р — уровень статистической значимости различий экспериментальных групп с интактными животными. |
По истечении недельного приёма концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов самцов марала, ни один из показателей системы гемостаза не отличался от таковых у интактных животных.
По истечении 14 дней приёма концентрата у крыс отмечено снижение содержания фибриногена в крови на 18% (р=0,016) по сравнению с интактными животными, а также повышение антикоагулянтной активности плазмы крови — повышение содержания антитромбина III на 25% (р <0,001).
После 30 дней приёма концентрата сохранялась гемостазиологическая картина, выявленная на 14-й день приёма концентрата: снижение содержания фибриногена уже на 23% (р=0,010) по сравнению с интактными животными, повышение концентрации антитромбина III на 26% (р <0,001). Кроме того, были зарегистрированы гипокоагуляция по внутреннему пути активации плазменного гемостаза [удлинение активированного парциального тромбопластинового времени на 11% (р=0,041) по сравнению с интактными животными] и повышение фибринолитической активности плазмы крови [укорочение времени спонтанного лизиса эуглобулинового сгустка на 11% (р=0,017)].
Можно предположить, что именно активация фибринолитической и антикоагулянтной систем крови, а также снижение содержания фибриногена в крови приводит к повышению уровня адаптивности системы гемостаза и не даёт развиться состоянию тромботической готовности при стрессорных воздействиях, таких как сверхпороговая физическая нагрузка.
Данные исследования состояния системы гемостаза интактных животных и контрольной группы, принимавшей добавки (глюкозу, аскорбиновую кислоту, фруктовую эссенцию), входящие в состав исследуемого концентрата, в дозе 4,5 мл/сут в течение 30 дней, представлены в табл. 2.
Таблица 2. Состояние системы гемостаза у интактных крыс и контрольной группы животных, принимавших добавки (глюкозу, аскорбиновую кислоту, фруктовую эссенцию), входящие в состав исследуемого концентрата (m [25–75%])
Метод исследования | Интактные животные (n=10) | Плацебо, 4,5 мл в течение 30 сут (n=10) |
Тромбоциты, ×109/л | p=0,345 | |
Индуцированная АДФ агрегация тромбоцитов, максимальные значения | p=0,186 | |
Силиконовое время, с | p=0,377 | |
АПТВ, с | p=0,308 | |
Протромбиновое время, с | p=0,227 | |
Тромбиновое время, с | p=0,345 | |
РФМК, мг/100 мл | p=0,473 | |
Содержание фибриногена, г/л | p=0,678 | |
Антитромбин III,% | p=0,364 | |
Спонтанный эуглобулиновый | p=0,326 | |
Примечания: АДФ — аденозиндифосфат; АПТВ — активированное парциальное тромбопластиновое время; РФМК — растворимые фибрин-мономерные комплексы; р — уровень статистической значимости различий контрольной группы с интактными животными. |
По итогам 30-дневного приёма добавок (глюкозы, аскорбиновой кислоты, фруктовой эссенции), входящих в состав исследуемого концентрата, показатели системы гемостаза у крыс не отличались от таковых у интактных животных. Следовательно, можно предположить, что действующими компонентами концентрата, повышающими адаптивность системы гемостаза за счёт активации антикоагулянтной и фибринолитической систем крови у крыс, а также снижения содержания фибриногена в крови, служат активные вещества, содержащиеся в крови и гистолизате из репродуктивных органов маралов.
Выводы
1. Повышение адаптированности системы гемостаза при приёме концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, заключается в повышении антикоагулянтной и фибринолитической активности плазмы крови, а также в снижении содержания фибриногена в крови крыс.
2. Действующими компонентами используемого концентрата «Пантогематоген (Лубяньгем)», повышающими адаптивные свойства системы гемостаза у крыс, служат активные вещества, содержащиеся в крови и гистолизате из репродуктивных органов самцов марала.
3. Максимальная адаптивная эффективность концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, достигается на 30-й день приёма.
Авторы декларируют отсутствие конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.
Источник финансирования: «Грант ректора АГМУ» (договор №1-гр от 21.02.2017).
Авторы выражают признательность ФГБНУ «Всероссийский НИИ пантового оленеводства» ФАНО России (г. Барнаул) в лице директора, профессора В.Г. Луницына за предоставленный концентрат «Пантогематоген (Лубяньгем)» и составные компоненты концентрата.
Об авторах
Александр Александрович Блажко
Алтайский государственный медицинский университет
Автор, ответственный за переписку.
Email: blazhko_1990@mail.ru
г. Барнаул, Россия
Игорь Ильич Шахматов
Алтайский государственный медицинский университет; Научно-исследовательский институт физиологии и фундаментальной медицины
Email: blazhko_1990@mail.ru
г. Барнаул, Россия; г. Новосибирск, Россия
Александр Юрьевич Жариков
Алтайский государственный медицинский университет; Научно-исследовательский институт физиологии и фундаментальной медицины
Email: blazhko_1990@mail.ru
г. Барнаул, Россия; г.Новосибирск, Россия
Валерий Иванович Киселёв
Алтайский государственный медицинский университет; Научно-исследовательский институт физиологии и фундаментальной медицины
Email: blazhko_1990@mail.ru
г. Барнаул, Россия; г.Новосибирск, Россия
Список литературы
- Шахматов И.И., Вдовин В.М. Изменения в системе гемостаза в ответ на однократную физическую нагрузку различной интенсивности. Вестн. новых мед. технол. 2011; 18 (3): 207-209.
- Момот А.П., Цывкина Л.П., Тараненко И.А. и др. Современные методы распознавания состояния тромботической готовности. Барнаул: Издательство АГУ. 2011; 137 с.
- Продукция на основе пантогематогена. Механизмы действия и особенности применения. Под ред. Н.И. Суслова и др. Новосибирск: Сибирское университетское издательство. 2008; 146 с.
- Зайцев А.А., Барабаш Л.В., Смирнова И.Н. и др. Состояние метаболического статуса спортсменов на фоне приёма продуктов пантового мараловодства. Лечебная физкультура и спортивная мед. 2012; (8): 21-25.
- Jiang N., Zhang S., Zhu J. et al. Hypoglycemic, hypolipidemic and antioxidant effects of peptides from red deer antlers in streptozotocin-induced diabetic mice. Tohoku J. Experim. Med. 2015; 236 (1): 71-9. doi: 10.1620/tjem.236.71.
- Zha E., Dandan L., Bai X. et al. A recombinant polypeptide from velvet antler of Cervus nippon Temminck exhibits similar immunomodulatory effects as its natural counterpart. Immunopharmacol. Immunotoxicol. 2016; 38 (6): 385-389. doi: 10.1080/08923973.2016.1233978.
- Jung E., Park Y., Woo M. et al. Hematopoietic effect of fermented deer antler extract in iron deficient diet-induced anemic rats. Chinese J. Integrative Med. 2016; 28: 1-6. doi: 10.1007/s11655-016-2598-7.
- Семёнов В.А., Латков Н.Ю., Кошелев Ю.А., Позняковский В.М. Применение пантогематогена в спортивно-медицинской практике. Техника и технология пищевых производств. 2014; 2: 113-117.
- Жариков А.Ю., Луницын В.Г., Лампатов В.В. и др. Влияние новых средств из сырья пантовых оленей на биосинтетические процессы в клетках скелетной мускулатуры крыс в условиях длительной физической нагрузки. Биомедицина. 2016; (1): 90-94.
- Chen F., Yin J., Liu J. et al. Preparation and determination of insulin-like growth factor I in deer antler, heart and blood. J. Chinese Med. Materials. 2014; (12): 2155-2158. PMID: 26080495.
- Zhao L., Mi Y., Guan H. et al. Velvet antler peptide prevents pressure overload-induced cardiac fibrosis via transforming growth factor (TGF)-β1 pathway inhibition. Eur. J. Pharmacology. 2016; 783: 33-46. doi: 10.1016/j.ejphar.2016.04.039.
- Блажко А.А., Шахматов И.И., Лычева Н.А., Москаленко С.В. Снижение риска развития состояния тромботической готовности при воздействии сверхпороговой физической нагрузки у крыс на фоне предварительного приёма пантогематогена. Соврем. пробл. науки и образования. 2016; (2). doi: 10.17513/spno.24255.
- Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под ред. Р.У. Хабриева. М.: Медицина. 2005; 829 с.
- Commission of the European Communities, 86/609/ЕЕС. ISSN 03780 6978 (1986).
- Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. М.: Ньюдиамед. 2008; 292 с.
Дополнительные файлы
![](/img/style/loading.gif)