Цитохимическое изучение иммунных процессов у новорожденных при ОРЗ
- Авторы: Гуревич Е.П.1
-
Учреждения:
- Казанский ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт им. С. В. Курашова
- Выпуск: Том 59, № 5 (1978)
- Страницы: 49-52
- Тип: Статьи
- Статья получена: 06.03.2021
- Статья одобрена: 06.03.2021
- Статья опубликована: 15.09.1978
- URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/62745
- DOI: https://doi.org/10.17816/kazmj62745
- ID: 62745
Цитировать
Полный текст
Аннотация
На различных этапах иммунного процесса у 101 новорожденного, больного ОРЗ, изучено содержание гликогена в лимфоцитах и нейтрофилах, фосфолипидов нейтрофилов и активность в них кислой и щелочной фосфатаз, активность сукцинатдегидрогеназы лимфоцитов и среднее содержание в них лизосом, а также индекс активности моноцитов. Выявлены особенности динамики цитохимических показателей в зависимости от преморбидного фона, фазы болезни, наличия бактериальных сопутствующих заболеваний и суперинфекции ОРЗ. Вычисление среднего содержания лизосом в лимфоцитах и индекса активности моноцитов может быть рекомендовано для применения в клинических лабораториях отделений патологии новорожденных.
Ключевые слова
Полный текст
На различных этапах иммунного процесса у 101 новорожденного, больного ОРЗ, изучено содержание гликогена в лимфоцитах и нейтрофилах, фосфолипидов нейтрофилов и активность в них кислой и щелочной фосфатаз, активность сукцинатдегидрогеназы лимфоцитов и среднее содержание в них лизосом, а также индекс активности моноцитов. Выявлены особенности динамики цитохимических показателей в зависимости от преморбидного фона, фазы болезни, наличия бактериальных сопутствующих заболеваний и суперинфекции ОРЗ. Вычисление среднего содержания лизосом в лимфоцитах и индекса активности моноцитов может быть рекомендовано для применения в клинических лабораториях отделений патологии новорожденных.
Известно, что лейкоциты периферической крови активно участвуют в иммунных реакциях организма, в том числе в ответе на инфекционный агент. Моноциты первыми реагируют на чужеродный антиген: резко повышается активность их лизосом и лизосомальных ферментов, в частности кислой фосфатазы (КФ) [1, 3]. РНК, вырабатываемая моноцитами, по-видимому, стимулирует антителогенез В-лимфоцитов и бласттрансформацию Т-лимфоцитов [9, 16]. В лимфоцитах повышается напряженность гликолитических процессов — возрастает активность дегидрогеназ [6], снижается содержание гликогена.
Вырабатываемые плазмоцитами антитела взаимодействуют с антигеном и комплементом. В элиминации образовавшихся комплексов антиген — антитело — комплемент ведущую роль играют нейтрофилы, они также осуществляют неспецифический фагоцитоз. Ряд авторов продемонстрировал прямую зависимость между способностью нейтрофилов к фагоцитозу, с одной стороны, и содержанием в них гликогена и активностью фосфатаз, с другой [4, 14]. В процессе фагоцитоза развиваются дистрофические изменения, а затем и гибель нейтрофилов. Эти процессы документируются выявлением, в частности, липидов в цитоплазме нейтрофилов (липофанероз). Необходимо отметить, что наиболее выраженные цитохимические изменения лейкоцитов возникают в ответ на микробные антигены. Вирусы и микоплазмы не вызывают изменения метаболизма у микро- и макрофагов [2].
Изучение цитохимии лейкоцитов крови (ферментов, содержания гликогена и липидов) представляет большой интерес, так как в свете описанных выше процессов оно может дать сведения для суждения о ходе иммуногенеза и реактивности новорожденного ребенка при ОРЗ.
Мы исследовали некоторые цитохимические показатели лейкоцитов при ОРЗ у новорожденных на разных этапах инфекционного процесса. Для этого были избраны следующие методы: выявление гликогена в лимфоцитах и нейтрофилах [13], фосфолипидов [15], щелочной фосфатазы (ЩФ) методом азосочетания с нафтолом AS-MX, кислой фосфатазы (КФ) нейтрофилов [И]; определение среднего количества лизосом в лимфоците и вычисление индекса активности моноцитов. Активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) лимфоцитов определяли с применением нитро-СТ и последующим вычислением среднего количества гранул формазана. Активность фермента выражали в цитохимическом коэффициенте содержания конечного продукта реакции [12]. Метаболизм лейкоцитов исследовали в динамике заболевания каждые 5—7 дней. Пробы крови брали в одно и то же время (в 7 ч утра) для исключения влияния суточного ритма и вызванного приемом пищи подъема активности ферментов. Полученные данные обработаны на ЭВМ «Минск-32».
Лимфоциты периферической крови по содержанию в них активных лизосом разделены нами на 4 группы — нулевую, первую, вторую и третью, в лимфоцитах которых наблюдалось соответственно 0, 1, 2, 3 и более гранул красителя, осажденного КФ (т. е. лизосом), независимо от их размера. Среднее содержание лизосом в лимфоците (ССЛЛ) равнялось сумме произведений номера группы на количество вошедших в группу лимфоцитов, деленной на число изученных клеток.
А. И. Брауде и др. (1962) описали две разновидности функционального состояния моноцитов, характеризовавшиеся различной активностью ферментов в них. При первой после окраски на КФ наблюдались крупные гранулы красителя, нередко сливающиеся между собой (активные моноциты), при второй — мелкие пылевидные гранулы (неактивные моноциты). Мы ввели определение индекса активности моноцитов (ИАМ), который равен отношению числа активных и неактивных клеток, встретившихся при изучении 200 лейкоцитов. ИАМ = A/H, где А — число активных моноцитов, Н — число неактивных моноцитов.
Нами обследован 101 новорожденный, больной ОРЗ. У 42,6% из них этиология ОРЗ была расшифрована при помощи прямого иммунофлуоресцентного метода (аденовирус обнаружен у 17 больных, парагрипп — у 8, грипп А и В — у 7, RS-вирус — у 11). У 24 новорожденных (1-я группа) матери были здоровы, беременность и роды протекали без осложнений. У матерей остальных 77 детей (2-я группа) имелись различные отклонения в течении беременности и родов: ранние и поздние токсикозы беременности (у 25%), производственные вредности (у 10%), патологические роды (у 29%). 14% матерей страдали экстрагенитальными заболеваниями. У 22% детей этой группы наблюдалась врожденная гипотрофия. У некоторых новорожденных обеих групп ОРЗ сочеталось с гнойными заболеваниями: пиодермией, фурункулезом, омфалитом, гнойным отитом. В качестве контроля обследовано 25 здоровых новорожденных.
Все дети поступали на 1—4-й день болезни в состоянии средней тяжести, с явлениями ринита, конъюнктивита, фарингита, лихорадки, интоксикации различной степени выраженности. В это время у детей обеих групп вдвое снижались количество гликогена лимфоцитов и число лимфоцитов, содержащих гликоген (см. табл.). Резко возрастала активность СДГ. Цитохимический показатель содержания (ЦПС) фосфолипидов, ЩФ нейтрофилов и величина индекса активности моноцитов находились в прямой зависимости от участия микробов в инфекционном процессе. При сопутствующих ОРЗ гнойных инфекциях они были выше нормы, при вирусных — в норме, лишь несколько снижалась активность ЩФ. Активность КФ в нейтрофилах снижалась у всех больных, но особенно значительно — у детей с неосложненным ОРЗ. Выявлено существенное различие в среднем содержании лизосом в лимфоцитах у детей 1-й и 2-й групп. Если в 1-й группе в первые дни заболевания ССЛЛ было нормальным, то во 2-й — повышенным. Процент лимфоцитов с одной лизосомой был ниже нормы в обеих группах.
На 5—8-й день болезни острые явления стихали: слизистые выделения из носа сменялись гнойными, исчезал конъюнктивит, температура снижалась до субфебрильной, уменьшалась интоксикация. В лимфоцитах при этом отмечалось повышение содержания гликогена, снижалась, но не нормализовалась активность СДГ. У больных с гнойными очагами постепенно приходили в норму ЦПС фосфолипидов, активность ЩФ и ИАМ. Повышались ССЛЛ и процент положительных клеток у новорожденных 1-й группы. У всех детей снижался процент лимфоцитов с одной лизосомой за счет увеличения содержания клеток с 2—3 лизосомами. Во 2-й группе ССЛЛ оставалось повышенным.
Если течение ОРЗ не осложнялось, не было суперинфекции, детей выписывали на 10—12-й день болезни. К этому времени количество гликогена и активность СДГ приближались к норме. Цитохимические показатели содержания ЩФ и фосфолипидов были субнормальными. Значительно повышалось число лизосом в лимфоцитах у детей 1-й группы.
У некоторых новорожденных на 8—10-й день пребывания в стационаре вновь повышалась температура, ухудшалось состояние, возобновлялись катаральные явления. В лейкоцитах периферической крови этих больных снижался уровень гликогена, повышалась активность СДГ. Все это говорило о вирусной суперинфекции. Иммунолюминесцентное исследование в этих случаях выявляло кроме ранее отмеченных новые вирусные антигены. Присоединение признаков гнойной инфекции сопровождалось повышением ЦПС фосфолипидов, ЩФ и ИАМ. Снижения ССЛЛ и процента активных лимфоцитов, не наблюдалось, но в крови детей статистически достоверно возрастал процент клеток, содержащих одну лизосому (см. табл.).
Полученные данные позволяют судить о ходе иммунного процесса при ОРЗ у новорожденных. Повышение активности лизосом моноцитов (что выражается в увеличении ИАМ) отмечено при возникновении гнойных осложнений и сопутствующих заболеваниях бактериальной этиологии. Таким образом, высокий индекс активности моноцитов говорит об активном участии макрофагов (моноцитов) периферической крови в формировании антибактериального иммунитета. При ОРЗ, не осложненном микробной инфекцией, ИАМ не изменялся. По-видимому, это объясняется тем, что виремия, в отличие от бактериемии, не приводит к активизации моноцитов периферической крови [2].
Сдвиги, подобные происходящим в моноцитах, обнаруживаются и в нейтрофилах. При неосложненном ОРЗ содержание ЩФ и КФ снижается, а количество фосфолипидов не изменяется. Видимо, это говорит о том, что нейтрофилы периферической крови, как и моноциты, не участвуют активно в иммунных реакциях при ОРЗ. Их функциональная активность несколько снижается, что приводит к бактериальным осложнениям. Гнойные осложнения ОРЗ вызывают повышение ЩФ и фосфолипидов нейтрофилов, свидетельствующее об участии микрофагов в иммунных реакциях.
В лимфоцитах во всех случаях отмечено увеличение активности гликолитических процессов, сопровождающееся уменьшением содержания гликогена в каждой клетке и количества содержащих гликоген лимфоцитов, а также повышение активности СДГ. Среднее содержание лизосом в лимфоците у детей 1-й группы возрастает к концу заболевания, что демонстрирует усиление иммуногенеза [6]. Вероятнее всего, этот показатель отражает увеличение процентного содержания при ОРЗ Т-лимфоцитов, осуществляющих разрушение поврежденных вирусом клеток (киллеры).
Цитохимические показатели у новорожденных при ОРЗ
Показатели | У здоровых новорожденных | При острых респираторных заболеваниях дни болезни | При ОРЗ и бактериальной инфекции | При суперинфекции ОРЗ | |||||
1-4-й | 5-8-й | 9-15-й | 1—4-й дни болезни | 1—4-й дни болезни | |||||
М±m | М±m | P1 | М±m | М±m | М±m | P1 | М±m | Р2 | |
Гликоген лимфоцитов, усл. ед. | 0,58+0,03 | 0,33±0,02 | <0,001 | 0,45±0,04 | 0,54+0,07 | 0,32±0,04 | <0,001 | 0,4±0,02 | >0,05 |
Лимфоциты, содержащие гликоген, % | 46+1,6 | 28±1,8 | <0,001 | 34±4,0 | 37±2,5 | 25±2,1 | <0,001 | 32±1,5 | <0,1 |
Гликоген нейтрофилов, усл. ед | 2,13+ ±0,014 | 2,16±0,03 | >0,1 | 2,21±0,05 | 2,26±0,07 | 2,25±0,05 | >0,02 | 2,14±0,09 | >0,1 |
Фосфолипиды нейтрофилов, усл. ед. | 2,12±0,012 | 2,11 ±0,04 | >0,1 | 2,14±0,04 | 2,08±0,04 | 2,34±0,05 | <0,001 | 2,13±0,02 | >0,1 |
Активность ЩФ нейтрофилов, усл. ед. | 1,02±0,03 | 0,8±0,04 | <0,02 | 0,75±0,04 | 0,63±0,06 | 1,18±0,07 | <0,05 | 0,71 ±0,03 | >0,1 |
Активность КФ нейтрофилов, усл. ед. | 1,74±0,02 | 1,52±0,04 | <0,001 | 1,65±0,08 | 1,61±0,06 | 1,64±0,05 | >0,05 | 1,63±0,02 | >0,1 |
Среднее количество лизосом в лимфоците | 1,08±0,02 | 1,34±0,04 | <0,001 | 1,36±0,05 | 1,38±0,03 | 1,30±0,04 | <0,001 | 1,33±0,03 | >0,1 |
Лимфоциты с одной лизосомой, % | 58±1,0 | 43±1,6 | <0,001 | 39±2,8 | 39±0,7 | 45±4,0 | <0,001 | 44±0,9 | <0,001 |
Индекс активности моноцитов | 0,39±0,05 | 0,38±0,06 | >0,1 | 0,44±0,07 | 0,43±0,27 | 2,12±0,38 | <0,001 | 0,45±0,04 | >0,1 |
Активность СДГ наблюдений | 15,75±0,13 | 20,75±0,33 | >0,001 | 19,46±0,49 | 17,61±0,31 | 21,2±0,4 | <0,001 | 20,55±0,2 | <0,001 |
Чиcло | 25 |
| 77 |
|
|
| 26 |
|
|
P1 — существенность различий в сравнении с показателями здоровых новорожденных; Р2 — существенность различий показателей к 9—15-му дню болезни и первых дней суперинфекции
У детей, рожденых яри осложненных беременности и родах (2-я группа), ССЛЛ повышено с первых дней и остается высоким в течение всего заболевания. Аналогичная картина отмечается у детей 1-й группы при суперинфекции ОРЗ. Это позволяет сделать предположение о наличии предварительной сенсибилизации и извращении некоторых этапов иммуногенеза у детей 2-й группы. Об этом свидетельствует также то обстоятельство, что у 22,9% этих детей возникли аллергические реакции на антибиотики, в то время как в 1-й группе они наблюдались лишь у 4% (Р <0,01). Подобная гиперплазия лизосом, также, как и связанная с этим повышенная активность КФ, отмечается при аллергических заболеваниях [8]. У всех детей в начале заболевания, в том числе в первые дни суперинфекции, высок процент лимфоцитов, содержащих одну лизосому. По данным С. М. Дульциной и В. В. Альперович (1975), именно активно делящиеся лимфоциты содержат КФ в небольшом количестве. Этим, видимо, можно объяснить значительный процент (до 64) лимфоцитов с одной лизосомой в начале инфекционного процесса и при суперинфекции.
Итак, результаты проведенного нами исследования и данные литературы свидетельствуют, что изучение обменных процессов, происходящих в лейкоцитах, позволяет судить о направленности иммунных реакций у новорожденных при ОРЗ. Гнойные осложнения ОРЗ (пиодермия, гнойный отит, омфалит и др.) приводят к увеличению ИАМ, ЩФ и фосфолипидов. При суперинфекции ОРЗ, чаще вследствие внутрибольничного инфицирования, наблюдается повышение активности СДГ, числа лимфоцитов с одной лизосомой, снижение гликогена лимфоцитов. У детей, рожденных при осложненных беременности и родах, иммунные процессы протекают с некоторыми отклонениями, что приводит к более частому возникновению аллергических реакций.
Предложенные нами методы оценки функционального состояния моноцитов и лимфоцитов — определение индекса активности моноцитов и среднего содержания лизосом в лимфоците — информативны и могут быть рекомендованы для применения в клинических лабораториях отделений патологии периода новорожденности.
Об авторах
Е. П. Гуревич
Казанский ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт им. С. В. Курашова
Автор, ответственный за переписку.
Email: info@eco-vector.com
Кафедра детских болезней
Россия, КазаньСписок литературы
- Аравийский Р. А. Арх. патол., 1975, 9. — 2. Ариэль Б. М. Там же, 1976, 1
- Брауде А. И. и др. ДАН СССР, 1962, 3; 1963, 1
- Венглинская Е. А., Шубич М. Г. Бюлл. экспер. биол. и мед., 1972, 11
- Дульцина С. М., Альперович В. В. Лаб. дело, 1975, 5
- Комиссарова И. А., Кудряшова Н. М. Педиатрия, 1970, 4
- Райхлин Н. Т. В кн.: Гистохимия и электронная микроскопия в клинической и экспериментальной онкологии. М., «Медицина», 1975
- Шубич М. Г., Самаркин В. Н. Лаб. дело, 1975, 10
- Cruchand A., Unannе Е. R., Schweiz. med. Wschr., 1972, 102, 33
- Diengdoh J. V., Turk J. L. Nature. 1965, 207, 1405
- Goldberg A. F., Barka J. Ibid., 1965, 195, 297
- Кaplow L. S. Bloods, 1955, 10, 1023
- McManus I. F.. Nature, 1946, 158, 202
- Sbarra A. J., Karnovsky M. L. J. Biol. Chem., 1959, 234, 1355
- Sheehan Н. L., Storey G. W. J. Path. Bact., 1947, 59, 336
- Waldron J. A. a. o. J. Immunol., 1974, 2, 746
Дополнительные файлы
![](/img/style/loading.gif)