Роль белка P53 в атм- и парп-зависимых путях репарации повреждений ДНК, вызванных ингибитором топоизомеразы II типа
- Авторы: Рамазанов Б.Р.1, Хуснутдинов Р.Р.1, Галембикова А.Р.1, Дунаев П.Д.1, Бойчук С.В.1
-
Учреждения:
- Казанский государственный медицинский университет
- Выпуск: Том 97, № 2 (2016)
- Страницы: 245-249
- Тип: Экспериментальная медицина
- Статья получена: 13.05.2016
- Статья опубликована: 15.04.2016
- URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/2910
- DOI: https://doi.org/10.17750/KMJ2016-245
- ID: 2910
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Цель. Изучение механизмов генотоксического действия доксорубицина в условиях ингибирования поли-(АДФ-рибоза)-полимеразы (ПАРП) и АТМ-киназы (от англ. Ataxia Telangiectasia Mutated) в клеточных линиях с различным р53-статусом.
Методы. Исследование проводили на фибробластах человека линий BJ и BJp53DD, культивированных в среде DMEM с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки, L-глутамина и антибиотиков. Ингибирования активности ПАРП и АТМ-киназы достигали добавлением синтетических ингибиторов Nu1025 и Ku55933 соответственно. Для индукции повреждений дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) использовали химиопрепарат доксорубицин. Анализ жизнеспособности клеток производили с помощью MTS-теста. Экспрессию белков системы репарации и маркёров апоптоза оценивали методом иммуноблоттинга. Распределение клеток по фазам клеточного цикла производили методом проточной цитометрии.
Результаты. Внесение в культуру клеток линии BJ р53DD ингибиторов активности ПАРП и AТМ-киназы приводило к значимому снижению количества жизнеспособных клеток на фоне индукции повреждений ДНК, вызываемых доксорубицином. Гибель клеток в данных образцах происходит по механизму апоптоза, что было подтверждено увеличением количества гиподиплоидных клеток и увеличением экспрессии расщеплённых форм ПАРП-1 и каспазы-3. Вышеописанные эффекты ингибитора топоизомеразы II типа доксорубицина были достоверно выше в фибробластах линии BJ с нефункциональным белком р53 (р53DD) по сравнению с обычными фибробластами человека линии BJ.
Вывод. В условиях несостоятельности р53-зависимых механизмов регуляции клеточного цикла в фибробластах человека BJ p53DD ингибирование активности ПАРП и АТМ-киназы приводит к усилению гибели клеток по механизму апоптоза, вызванного действием доксорубицина.
Ключевые слова
Об авторах
Булат Рашитович Рамазанов
Казанский государственный медицинский университет
Автор, ответственный за переписку.
Email: boichuksergei@mail.ru
Рамиль Рамисович Хуснутдинов
Казанский государственный медицинский университет
Email: boichuksergei@mail.ru
Айгуль Рафиковна Галембикова
Казанский государственный медицинский университет
Email: boichuksergei@mail.ru
Павел Дмитриевич Дунаев
Казанский государственный медицинский университет
Email: boichuksergei@mail.ru
Сергей Васильевич Бойчук
Казанский государственный медицинский университет
Email: boichuksergei@mail.ru
Список литературы
- Бойчук С.В., Рамазанов Б.Р. Нарушения системы репарации ДНК - роль в онкогенезе и терапии злокачественных новообразований. Казанский мед. ж. 2014; 95 (3): 307-314.
- Arnaudeau C., Lundin C., Helleday T. DNA double-strand breaks associated with replication forks are predominantly repaired by homologous recombination involving an exchange mechanism in mammalian cells. J. Mol. Biol. 2001; 307: 1235-1245. http://dx.doi.org/10.1006/jmbi.2001.4564
- Dunkern T.R., Wedemeyer I., Baumgartner M. et al. Resistance of p53 knockout cells to doxorubicin is related to reduced formation of DNA strand breaks rather than impaired apoptotic signaling. DNA Repair (Amst). 2003; 2: 49-60. http://dx.doi.org/10.1016/S1568-7864(02)00185-4
- Fedier A., Moawad A., Haller U., Fink D. p53-deficient cells display increased sensitivity to anthracyclines after loss of the catalytic subunit of the DNA-dependent protein kinase. Int. J. Oncol. 2003; 23 (5): 1431-1437. http://dx.doi.org/10.3892/ijo.23.5.1431
- Matsuoka S., Ballif B.A., Smogorzewska A. et al. ATM and ATR substrate analysis reveals extensive protein networks responsive to DNA damage. Science. 2007; 316: 1160-1166. http://dx.doi.org/10.1126/science.1140321
- Norbury C.J., Zhivotovsky B. DNA damage-induced apoptosis. Oncogene. 2004; 23 (16): 2797-2808. http://dx.doi.org/10.1038/sj.onc.1207532
- Serrano M.A., Li Z., Dangeti M. et al. DNA-PK, ATM and ATR collaboratively regulate p53-RPA interaction to facilitate homologous recombination DNA repair. Oncogene. 2013; 32: 2452-2462. http://dx.doi.org/10.1038/onc.2012.257
- Shiloh Y. The ATM-mediated DNA-damage response: taking shape. Trends Biochem. Sci. 2006; 31 (7): 402-410. http://dx.doi.org/10.1016/j.tibs.2006.05.004
- Smith G.C., Divecha N., Lakin N.D., Jackson S.P. DNA-dependent protein kinase and related proteins. Biochem. Soc. Symp. 1999; 64: 91-104. http://dx.doi.org/10.1515/9781400865048.91
- Yang J., Yu Y., Hamrick H.E., Duerksen-Hughes P.J. ATM, ATR and DNA-PK: initiators of the cellular genotoxic stress responses. Carcinogenesis. 2003; 24 (10): 1571-1580. http://dx.doi.org/10.1093/carcin/bgg137
- Zhou B.B., Elledge S.J. DNA damage response: putting checkpoints in perspective. Nature. 2000; 408: 433-439. http://dx.doi.org/10.1038/35044005
Дополнительные файлы
![](/img/style/loading.gif)