Эффективность тактивина и токоферола для коррекции гепатотоксического действия аминной соли 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты

Полный текст

Одна из актуальных медико-биологических ляет изучение токсического влияния стойких орпроблем современности - поиск путей коррек-ганических загрязнителей на гепатобилиарную ции повреждающего действия экотоксикантов систему, а также разработка методов коррекции на организм человека. Среди этих соединений последствий их воздействия. наибольшее внимание привлекают стойкие орга-Ранее нами были уточнены механизмы понические загрязнители, к числу которых отно-вреждающего воздействия гербицида 2,4-ДА сится и аминная соль 2,4-дихлофеноксиуксусной на иммунную систему [3, 6, 7]. Учитывая мехакислоты (2,4-ДА) - эффективный и широко ис-низмы токсического действия 2,4-ДА, для корпользуемый в сельском хозяйстве гербицид [13]. рекции могут быть использованы препараты, Эти соединения обладают выраженными куму-сочетано обладающие иммуномодулирующим, лятивными свойствами, значительной токсич-гепатопротективным и антиоксидантным дейностью, а отдалённые последствия воздействия ствиями. В связи с этим в качестве средств кордаже малых доз связаны с гонадотропным, эм-ригирующей терапии нами выбран иммуномобрио-, иммуно- и гепатотоксическим действиями дулятор тимуса экстракт (тактивин) [9, 12, 14] [2]. Среди механизмов повреждающего действия и витамин Е (токоферол), характеризующийся стойких органических загрязнителей ведущее антиоксидантным, иммуномодулирующим, место занимает активация свободнорадикально-мембраностабилизирующим и гепатопротективго окисления липидов биологических мембран, ным действиями [4, 11, 15, 16]. что неизбежно приводит к развитию синдрома Целью исследования было изучение эффекпероксидации [2, 8]. Особую важность представ-тивности индивидуального и сочетанного применения тактивина и токоферола для коррекции гепатотоксических эффектов гербицида 2,4-ДА. Протоколы экспериментов и условия содержания животных были составлены в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и приказом МЗ РФ №267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики». Эксперименты выполнены на 75 белых неинбредных половозрелых крысах с массой тела 200-220 г. Животные были разделены на пять групп (по 15 животных в каждой): контроль; 2,4-ДА; 2,4-ДА + тактивин; 2,4ДА + токоферол; 2,4-ДА + тактивин + токоферол. Гербицид 2,4-ДА вводили внутрижелудочно в течение 28 дней в дозе 42 мг/кг, что соответствует суммарной полулетальной дозе 1200 мг/кг [10]. Токоферол (в дозе 50 мг/кг, внутрижелудочно) и тактивин (в дозе 0,25 мг/кг, внутримышечно) вводили ежедневно с 1-го по 6-й дни, считая день окончания введения токсиканта нулевым днём [11, 12]. Для исследования активности аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ) и содержания билирубина использовали стандартные тест-наборы. Морфологическое состояние печени оценивали путём микроскопии срезов ткани печени, окрашенных гематоксилином и эозином. Электронно-микроскопические исследования выполнены на электронном микроскопе JEM-100S. Результаты регистрировали на следующий день после окончания введения препаратов коррекции (7-е сутки). Статистическую обработку проводили с использованием методов вариационной статистики [1], пакета программ Statistica 8.0. Нормальность распределения данных проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка. При нормальности распределения признака оценку значимости различий проводили с использованием t-критерия Стьюдента, в противном случае вычисляли медиану и межквартильный интервал. Дисперсионный анализ проводили с использованием Н-критерия Краскела-Уоллиса, для множественных сравнений использован Q-критерий Дана. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05. Данные представлены в процентах по отношению к контролю. Гепатотоксические эффекты 2,4-ДА проявились повышением содержания аминотрансфераз, нарушением процессов конъюгации билирубина и морфологическими изменениями. Так, на 7-е сутки отмечено повышение уровня АЛТ до 426,32% (p <0,00001) и АСТ до 345,65% (p <0,00001, рис. 1), что может свидетельствовать не только о повышении проницаемости мембран, но и об их Рис. 1. Влияние аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты (ДА) и её комбинации с тактивином (Т) и витамином Е (Е) на содержание аминотрансфераз (А - аланинаминотрансфераза, Б - аспартатаминотрансфераза) в сыворотке крови экспериментальных животных. Рис. 2. Влияние аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты (ДА) и её комбинации с тактивином (Т) и витамином Е (Е) на содержание билирубина (А - общего, Б - прямого) в сыворотке крови экспериментальных животных. деструкции. Также гербицид вызывал развитие гипербилирубинемии: концентрация общего и прямого билирубина увеличивалась соответственно до 155,21% (p <0,00001) и 142,99% (p <0,00001) (рис. 2). При светооптических исследованиях выявлены отчётливые нарушения гемодинамики, дистрофические и некротические процессы в гепатоцитах с замещением их грубоволокнистой соединительной тканью. Наблюдали преимущественное повреждение «светлых» гепатоцитов, которым присуща дезинтоксикационная функция (рис. 3). При электронно-микроскопическом исследовании отмечены вакуолизация цитоплазмы, фрагментация гранулярной эндоплазматической сети, бесструктурные зоны, набухание митохондрий и уменьшение количества крист, что свидетельствует о снижении их функциональной активности (рис. 4). Рис. 3. Печень крысы при воздействии аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты. Полнокровие центральных вен и синусоидных капилляров. Гиперемия сосудов портальных трактов. Сглаженность балочного рисунка. Нерезкая белковая дистрофия (мутное набухание) гепатоцитов. Гематоксилин и эозин, ×400. Рис. 4. Печень крысы при воздействии аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты (электронная микрофотография, ×5000); 1 - ядро гепатоцита; 2 - глыбки гетерохроматина; 3 - фрагментация гранулярной эндоплазматической сети; 4 - набухшие митохондрии; 5 - микроорганизмы; 6 - бесструктурные зоны. Применение тактивина статистически значимо снижало, но не нормализовало активность АЛТ (до 160,53%, p=0,0069) и АСТ (до 129,35%, p=0,0036, см. рис. 1). Тактивин устранял индуцированную гербицидом гипербилирубинемию (100,0%, p=1,00), но не изменял содержание прямого билирубина (см. рис. 2). На светооптическом уровне выявлено уменьшение некротизированных клеток, увеличение количества клеток Купфера и двухъядерных гепатоцитов, что свидетельствует об усилении репаративных процессов. Отмечено увеличение количества митохондрий, рибосом и цистерн гранулярной эндоплазматической сети в гепатоцитах. Известно, что функциональное состояние печени и системы иммунитета тесно взаимосвязано. Рядом авторов показано, что состояние мононуклеарных фагоцитов, а в последние годы - и нейтрофилов, оказывает значительное влияние на процессы репаративной регенерации печени [5, 6, 14]. В ранее проведённых нами исследованиях установлено выраженное корректирующее влияние тактивина и токоферола на повреждающее влияние гербицида, функциональное состояние мононуклеарных фагоцитов и нейтрофилов (микробицидность, кислородозависимый метаболизм, поглотительная активность) [3, 7]. Также известно, что пептиды вилочковой железы (тимуса) оказывают наряду с иммуномодулирующим и гепатопротективное действие: усиливают регенерацию после частичной гепатэктомии [14]. Показаны уменьшение гепатотоксического действия циклофосфана тактивином [6], восстановление гипоплазии Т-зависимых зон пейеровых бляшек, повышение пролиферации, снижение степени деструктивных изменений клеток тактивином при хроническом токсическом гепатите [9], что можно связать с активацией макрофагов, которые служат регуляторами функций фибробластов [14]. Вероятно, указанные механизмы лежат в основе гепатопротективного эффекта тактивина. Использование токоферола существенно ослабляло повреждающее действие гербицида: нормализовалось содержание трансаминаз и прямого билирубина (см. рис. 1, 2). Морфологически определялось уменьшение жировой дистрофии, количества некротизированных клеток и увеличение двухъядерных гепатоцитов. Отмечены сохранность клеточных и субклеточных мембран гепатоцитов, увеличение количества митохондрий, цистерн гранулярной эндоплазматической сети, агранулярного эндоплазматического ретикулума. При введении токоферола усиливались процессы регенерации и митотической активности гепатоцитов. Гепатопротективный эффект токоферола обусловлен, вероятно, его антиоксидантным и мембраностабилизирующим действием, способностью усиливать синтетические процессы, что согласуется с данными других авторов [4, 8, 16]. Сочетанное применение токоферола и тактивина оказывало большее нормализующее влияние на морфофункциональное состояние гепатобилиарной системы: отмечено устранение гиперферментемии и гипербилирубинемии (см. рис. 1, 2). Происходило увеличение числа митозов, уменьшение белковой и жировой дистрофии гепатоцитов (рис. 5). Ультраструктурный анализ выявил увеличение количества удлинённых митохондрий с многочисленными кристами, элементов гранулярной эндоплазматической сети, тесно вза Рис. 5. Печень крысы при воздействии аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты и коррекции комбинацией «тактивин + витамин Е». Незначительная лимфоцитарная инфильтрация вблизи междольковой вены и междолькового жёлчного протока. Окраска гематоксилином и эозином. имодействующих с митохондриями, что отражает активность окислительно-восстановительных процессов и свидетельствует об активации регенераторных и белковосинтетических процессов в гепатоцитах (рис. 6). ВЫВОД Углублены представления о повреждающем воздействии гербицида аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты на морфофункциональное состояние печени. Установлено корригирующее влияние тактивина и токоферола на гепатотоксическое действие аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты, наибольшая эффективность показана при сочетанном применении препаратов.

Об авторах

Зайтуна Алексеевна Ахметченко

Башкирский государственный университет, г. Уфа

Наталья Альбертовна Муфазалова

Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа

Ляйсан Фагимовна Муфазалова

Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа

Email: lya-mufazalova@ya.ru

Анна Дмитриевна Ремезова

Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа

Альбина Яхиевна Мухаметзянова

Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа

Список литературы

Дополнительные файлы