Влияние новых четвертичных фосфониевых солей с высшими алкильными заместителями на проницаемость клеточных мембран для ионов натрия in vitro

Полный текст

Важнейший этап при разработке и внедрении новых лекарственных препаратов - исследование биодоступности, то есть количества неизменённого вещества, достигшего плазмы крови, по отношению к исходной дозе [5]. В качестве естественной модели для исследования проницаемости биологических мембран наиболее удобна мембрана эритроцита (МЭ), так как, во-первых, эритроцит - фактически идеальная изолированная («чистая») мембрана, во-вторых, была доказана корреляция между свойствами МЭ и других клеток [4, 6]. Na+-Li+-противотранспорт (Na+-Li+-ПТ) в МЭ может быть использован как модель in vitro для определения биодоступности различных веществ и лекарственных препаратов. Целью исследования была оценка влияния новых синтезированных веществ С10, С12, С14, С16, С18, обладающих ранозаживляющим, антибактериальным и фунгицидным действием, на проницаемость клеточных мембран для ионов натрия в модели in vitro. Объектом исследования были фармакологически активные вещества - четвертичные фосфониевые соли с высшими алкильными заместителями: C10 - [(C6H5)3P+C10H21]Br-, C12 - [(C6H5)3P+C12H25]Br-, C14 - [(C6H5)3P+C14H29]Br-, C16 - [(C6H5)3P+C16H33]Br-, C18 - [(C6H5)3P+C18H37]Br-. Изучали влияние этих веществ в различной концентрации на скорость Na+-Li+-ПТ в МЭ in vitro. Определение скорости Na+-Li+-ПТ в МЭ (в мкМ лития на 1 л клеток в час) проводили по методу M. Canessa и соавт. [6]: определяли обмен внутриклеточного лития в загруженных этим ионом клетках на внеклеточный натрий из среды инкубации. Концентрацию лития регистрировали методом атомной абсорбционной спектрофотометрии в эмиссионном режиме. Кровь в количестве 3 мл забирали из вены самотёком в пластиковые пробирки, смоченные гепарином (20 ЕД на 1 мл крови), содержимое перемешивали, пробирки помещали в контейнер с тающим льдом. Исследование состояло из следующих этапов: отделение эритроцитов, промывание эритроцитов, прединкубация (3 ч), промывание эритроцитов, инкубация (1 ч), определение концентрации лития, вычисление скорости Na+-Li+-ПТ. Внесение исследуемых препаратов разных концентраций in vitro осуществлялось в среду В (среда с Na+ при 1 ч инкубации). Оценку влияния фармакологически активных веществ С10, С12, С14, С16, С18 на проницаемость клеточных мембран по Na+ проводили путём подбора концентрации исследуемых веществ, не вызывающей гемолиз эритроцитов. Гемолиз определяли визуально. Дальнейшие исследования проводили с разными концентрациями изучаемых веществ: 0,001; 0,005; 0,01; 0,025 и 0,05 мкМ. Фармакологически активные вещества С10, С12, С14, С16, С18 увеличивали скорость Na+-Li+-ПТ в МЭ, однако этот эффект зарегистрирован лишь при их минимальной концентрации - 0,001-0,005 мкМ (табл. 1, рис. 1). При других концентрациях (0,01-0,05 мкМ) скорость Na+-Li+-ПТ изменялась незначительно (p >0,05). Наибольшее влияние на проницаемость по Na+ исследуемые вещества оказывали при концентрации 0,001 мкМ, при этом вещество С10 увеличило скорость Na+-Li+-ПТ в МЭ с 337 до 403 мкМ Li/л клеток в час (на 11,9%), вещество С12 - до 398 (на 11,8%), вещество С14 - до 430 (на 12,7%), вещество С16 - до 443 (на 13%), вещество С18 - до 416 мкМ Li/л клеток в час (на 12,3%). Более высокие концентрации (0,01-0,05 мкМ) не оказывали существенного влияния на проницаемость клеточной мембраны для Na+. ВЫВОДЫ 1. Фармакологически активные вещества С10, С12, С14, С16, С18 в малой концентрации (0,001-0,005 мкМ) увеличивают скорость Na+-Li+-ПТ в МЭ в 1,2-1,3 раза, а большие концентрации существенного влияния на проницаемость по Na+ не оказывают. 2. Подобранные нами условия изучения влияния фармакологически активных веществ С10, С12, С14, С16, С18 на проницаемость клеточной мембраны для Na+ по изменению скорости Na+-Li+-ПТ в МЭ могут быть использованы при оценке их биодоступности из лекарственных форм наружного применения. Таблица 1 Влияние фармакологически активных веществ С10, С12, С14, С16, С18 на скорость Na+-Li+-противотранспорта (Na+-Li+-ПТ) в мембране эритроцита (М±m) in vitro Вещество Исходное значение скорости Na+-Li+-ПТ Скорость Na+-Li+-ПТ, мкМ Li/л клеток в час, при различной концентрации веществ С10-С18, мкМ 0,001 0,005 0,01 0,025 0,05 С10 337±5 403±13* 370±4* 322±7 362±5 376±1 С12 337±5 398±15* 350±24* 303±12 322±15 323±15 С14 337±5 430±27* 381±5* 359±7 355±8 343±7 С16 337±5 443±39* 441±42* 369±20 Гемолиз Гемолиз С18 337±5 416±10* 368±4* 327±5 365±14 381±6 Рис. 1. Влияние концентрации фармакологически активных веществ С10, С12, С14, С16, С18 на скорость Na+-Li+-противотранспорта (Na+-Li+-ПТ) в мембране эритроцита. Примечание: *статистически значимые различия с исходным значением скорости Na+-Li+-ПТ (р <0,05). орлова.eps

Об авторах

Ольга Валериановна Орлова

Казанский государственный медицинский университет

Email: olqa570821@yandex.ru

Владимир Николаевич Ослопов

Казанский государственный медицинский университет

Светлана Анатольевна Сидуллина

Казанский государственный медицинский университет

Список литературы

Дополнительные файлы