Функциональное состояние нейтрофилов при интоксикации тетрахлорметаном у крыс

Полный текст

Тетрахлорметан (ТХМ) широко используют в промышленности как растворитель масел, смол, битумов, полимеров, каучука, для экстрагирования жиров и алкалоидов, как обезжиривающее средство при обработке кож, чистке и обезжиривании одежды в быту и на производстве. ТХМ может поступать в организм через кожу, дыхательные пути, пищеварительный тракт. Отравления ТХМ относятся к наиболее частым видам интоксикаций различными ядовитыми жидкостями [6, 7]. Достаточно хорошо изучено гепатотоксическое действие ТХМ, однако высокая смертность при острых интоксикациях может быть также обусловлена формированием глубокого иммунодефицита [3-5, 9, 11]. В связи с этим целью исследования стало изучение влияния острой интоксикации ТХМ на функциональное состояние нейтрофилов. Протоколы экспериментов и содержание животных были составлены в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медикобиологических исследований с использованием животных» (1985) и приказом Министерства Здравоохранения РФ №267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики». Эксперименты были выполнены на 90 белых неинбредных крысах с массой тела 200-220 г. Животные были разделены на две группы (по 45 животных в группе): контроль и опыт с внутрижелудочным введением ТХМ в дозе 1,25 мл/кг 50% раствора в оливковом масле на протяжении 4 сут [8]. Определяли количество лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови, интенсивность кислородзависимого метаболизма [спонтанный и индуцированный тест с нитросиним тетразолием (НСТ-тест)], поглотительную способность полиморфноядерных лейкоцитов (ПМЯЛ), антимикробную активность ПМЯЛ в условиях функционирования и блокады (азидом натрия) кислородзависимых факторов микробицидности в отношении грибов Candida albicans, активность миелопероксидазы (МПО) и содержание катионных белков (КБ) в нейтрофилах [2, 10]. Активность МПО и КБ оценивали по интенсивности окраски, пользуясь 5-балльной шкалой по методу L.S. Kaplow, вычисляли процент активных клеток в мазке и средний цитохимический коэффициент (СЦК): СЦК = (1а + 2в + 3с + 4d) / 100, где 1-4 - интенсивность окраски; а, в, с, d - количество ПМЯЛ с соответствующей интенсивностью окраски [10]. Результаты регистрировали на 7-е, 14-е и 28-е сутки от окончания введения токсиканта. Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием методов вариационной статистики [1], пакета программ «Statistica 6.0». Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Вилка. При нормальности распределения признака оценку значимости различий проводили с использованием t-критерия Стьюдента, достоверными считали различия при уровне статистической достоверности р <0,05. Установлено, что на 7-е сутки после окончания введения токсиканта развилась лейкопения: количество лейкоцитов составило 66,1% (p <0,01) аналогичного показателя в контрольной группе за счёт снижения числа лимфоцитов до 62,1% (p <0,001). Это сопровождалось глубоким угнетением как оксидантных, так и неоксидантных факторов микробицидности ПМЯЛ. Так, интенсивность кислородзависимого киллинга снизилась почти в 2 раза, индекс инактивации (ИИ) составил 59,1% (p <0,001), что цитохимически подтверждалось снижением количества МПО-позитивных клеток до 67,9% (p <0,001) и СЦК до 67,8% (p <0,001) значения в контроле. Зарегистрировано повышение активности кислородзависимого метаболизма ПМЯЛ в спонтанном НСТ-тесте. В то же время в условиях индукции отмечено снижение интенсивности оксидантного метаболизма ПМЯЛ (индуцированный НСТ-тест). В условиях блокады оксидантных механизмов микробицидности азидом натрия ИИ снизился более чем в 4 раза (24,8%, p <0,001), а цитохимически было выявлено снижение доли КБ-позитивных клеток до 36,3% (p <0,001), а СЦК - до 38,8% (p <0,001) контрольного показателя. Отмечено снижение поглотительной способности нейтрофилов: фагоцитарный индекс (ФИ) составил 76,4% (p <0,001). На 14-е сутки сохранялась индуцированная ТХМ лейкопения, обусловленная уже равномерным снижением количества как нейтрофилов, так и лимфоцитов до 59,1% (p <0,02) и 65,9% (p <0,001) соответственно. Активность кислородзависимых механизмов киллинга ПМЯЛ оставалась сниженной (ИИ 61,3%, p <0,001), как и активность МПО: процент МПО-позитивных клеток составил 72,2% (p <0,001), а СЦК - 72,8% (p <0,001). Также сохранялось снижение оксидантного метаболизма ПМЯЛ (индуцированный НСТ-тест). На фоне блокады оксидантных механизмов фунгицидность ПМЯЛ несколько повышалась (по сравнению с 7-ми сутками), хотя и не достигала уровня интактных животных (ИИ 60,5%, p <0,01). Это сочеталось с 2-кратным (по сравнению с 7-ми сутками) повышением содержания КБ в нейтрофильных гранулоцитах: процент КБ-положительных клеток составил 66,3% (p <0,001), а СЦК - 67,1% (p <0,001). При сохраняющемся снижении поглотительной активности ПМЯЛ (ФИ 78,5%, p <0,05) происходило увеличение количества клеток, участвующих в фагоцитозе (до 131,0%, p <0,01). К 28-м суткам выраженность лейкопении несколько уменьшалась за счёт увеличения числа лимфоцитов (80,5%, p <0,05) при сохранявшейся нейтропении (60,9%, p <0,001). Микробицидность ПМЯЛ повышалась, но не восстанавливалась: в условиях функционирования и блокады кислородзависимых механизмов ИИ составил 76,0% (p <0,02) и 78,1% (p <0,01) соответственно. Это согласовалось с сохраняющимся снижением доли МПО-позитивных клеток до 74,1% (p <0,001) и СЦК до 74,3% (p <0,01) в МПО-системе ПМЯЛ, интенсивности кислородзависимого метаболизма ПМЯЛ (индуцированный НСТ-тест) и доли КБ-позитивных клеток до 71,6% (p <0,001), СЦК до 72,6% (p <0,001) в КБ-системе ПМЯЛ. Число нейтрофилов, участвующих в фагоцитозе, уменьшалось (по сравнению с 14-ми сутками) до уровня интактных животных при сохранявшемся снижении их поглотительной активности (ФИ 86,6%, p <0,05). ВЫВОДЫ 1. Полученные данные свидетельствуют о том, что острая интоксикация ТХМ приводит к глубоким нарушениям функционирования нейтрофилов: снижается активность пероксидазозависимых и пероксидазонезависимых оксидантных факторов микробицидности, кислороднезависимых механизмов киллинга, поглотительная способность клеток. 2. Указанные нарушения не устраняются к 28-м суткам наблюдения, что, безусловно, требует изыскания возможных путей их фармакологической коррекции.

Об авторах

Евгений Константинович Алёхин

Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа

Ляйсан Фагимовна Муфазалова

Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа

Email: lya-mufazalova@ya.ru

Наталья Альбертовна Муфазалова

Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа

Список литературы

Дополнительные файлы