Immunohistochemical characteristic of regional lymph nodes in carcinoma

Full Text

Реакции органов иммунной системы, и прежде всего регионарных лимфатических узлов, оказывают решающее влияние на течение опухолевого процесса. Однако если в одних случаях барьерная функция лимфоузлов эффективна, то в других — практически не реализуется. Несмотря на значительное число исследований по данной проблеме, вопрос о роли лимфатических узлов при развитии рака остается открытым. Это объясняется не только сложностью предмета, отражающего характер взаимодействий в иммунной системе на клеточном и гуморальном уровнях, но и отсутствием единого методического подхода к изучению лимфоузлов. Предложенная в 1973 г. схема ВОЗ [6] не может отвечать задачам современных исследований в связи с существенной модификацией традиционных методов изучения лимфатических узлов [5] и появлением принципиально новых, прежде всего иммуногистохимических с применением моноклональных антител [9].

Целью настоящей работы являлось иммуногистохимическое изучение регионарных лимфатических узлов в норме и в процессе развития рака, а также определение факторов, способствующих приживлению в лимфоузлах опухолевых клеток.

Были изучены 124 регионарных лимфатических узла, полученных во время операций по поводу рака желудка, легкого, молочной железы, кишечника и пищевода от 30 онкологических больных. В качестве контроля послужили 50 лимфатических узлов тех же регионов, полученные от 10 практически здоровых лиц, погибших от случайных причин (судебно-медицинские вскрытия).

Лимфатический узел вдоль большой оси разрезали на две части. Одну половину использовали для иммуногистохимического исследования, другую — для гистологической окраски азур-II-эозином и пиронином по Браше. Иммуногистохимическое исследование проводили по схеме, разработанной Оксфордским университетом для лимфоретикулярной ткани [81. Применялись моноклональные антитела CD 1 CD 2, CD 3, CD 4, CD 8, CD 10, CD 20, CD 45 и антииммуноглобулины фирм “BioGenex Laboratories” (США), “Dako A/S” (Дания) и “Sigma Immuno Chemicals” (США). После подготовки срезов использовали иммунофлюоресцентный и РАР-методы [9]. Морфометрический анализ клеточных элементов проводили с помощью окулярной сетки Г.Г. Автандилова [1]. Полученный материал был разделен на 3 группы: 1-я — контроль (n = 50), 2-я — лимфоузлы без метастазов рака (70), 3-я — лимфоузлы с наличием метастазов различного объема (54).

Установлено, что при развитии рака до появления в лимфоузлах метастазов происходит увеличение общего числа CD 45(+) лимфоидных клеток (см. табл.). Меняется и качественный состав популяции лимфоцитов. В гиперплазированной паракортикальной зоне возрастает число CD 2(+) и СВ 3(+) Т-клеток (рис. 1), что реализуется за счет CD 4(+) хелперов/индукторов¹ и CD 8(+) киллеров/супрессоров*. Кроме того, появляется больше CD 1 (+) и CD 10 (+) незрелых (бластных) форм Т-клеток, которые либо поступают из тимуса, либо образуются в результате бласттрансформации в ответ на опухолевый антиген. Параллельно в корковом плато (фолликулы с реактивными центрами) и в мякотных тяжах возрастает количество CD 20 (+) В-лимфоцитов и антителообразующих плазматических клеток (рис. 2). При наличии метастазов в лимфоузлах иммуногистохимическая картина существенно меняется. Несмотря на сохранение общей клеточности CD 45 (+) лимфоидной ткани, происходит уменьшение процента CD 2 (+) и CD 3 (+) Т-клеток, а также CD 1 (+) и CD 10 (+) бластов, CD 4 (+) хелперов/индукторов, CD 8(+) киллеров/супрессоров. В то же время число CD 20 (+) В-лимфоцитов и антителообразующих плазмоцитов остается большим.

 

 

Рис. 1 Высокое содержание CD 2 (+) и CD 3 (+) Т-лимфоцитов в гиперплазированной паракортикальной зоне. PAP-метод X 100.

 

 

Рис. 2. Антителообразующие клетки в мякотных тяжах. Иммунофлюоресцентный метод, х 400.

 

Таблица. Иммуногистохимическая характеристика клеточных элементов лимфатического узла в норме и при развитии рака (в % от общего количества клеток; М±m)

Группы наблюдений	CD 45(+) общее количество лимфоцитов	CD 1 (+) и CD 10 (+) незрелые Т-клетки, лимфобласты	CD 2 (+) и CD 3 (+) Т-лимфоциты	CD 4 (+) Т-хелперы и T-индукторы	CD 8 (+) T-киллеры и Т-супрессоры	CD 20 (+) В-лимфоциты	Продуценты антител
1-я (контроль)	71,4±0,72	5,1±0,23	34,6±0,53	21,6±0,20	15,6±0,09	18,3±0,22	2,5±0,13
2-я	76,8±0,95	9,6±0,19	42,5±0,58	29,4±0,26	20,7±0,14	26,5±0,41	10,4±0,12
Р	< 0,05	< 0,05	< 0,05	< 0,05	< 0,05	< 0,05	< 0,05
3-я	75,3±0,57	5,3±0,33	30,7±0,16	19,5±0,18	14,6±0,11	24,4±0,29	9,4±0,15
Р1	< 0,05	> 0,05	< 0,05	> 0,05	> 0,05	< 0,05	< 0,05
Р2	> 0,05	< 0,05	< 0,05	< 0,05	< 0,05	> 0,05	> 0,05

Примечание. Р — разница между данными 2-й группы и контролем, Р₁ — между данными 3-й группы и контролем, Р₂ — между данными 2 и 3-й групп.

 

Таким образом, в регионарных лимфатических узлах при развитии рака вначале происходит активация как Т-, так и В-клеточной систем иммунитета. Причем увеличение CD 8 (+) киллерно-супрессорной популяции реализуется в основном за счет цитотоксических клеток. Это следует из того факта, что Т-супрессоры угнетают продукцию иммуноглобулинов разных классов [3], а поскольку в лимфоузлах при раке гуморальные иммунные реакции с высокой антителообразующей способностью клеток остаются на высоком уровне, то, вероятно, увеличения числа Т-супрессоров не происходит. Данный вывод подтверждается и ультраструктурными исследованиями, в которых показано увеличение количества цитотоксических Т-киллеров в лимфоузлах на ранних стадиях рака [4]. Подобная реакция регионарных лимфатических узлов при наличии Т-киллеров, а также хелперов и индукторов, усиливающих их действие, тормозит на какое-то время процесс метастазирования. Поддерживается популяция активированных Т-клеток за счет поступления из тимуса молодых форм и при помощи реакции бласт- трансформации — CD 1 (+) и CD 10 (+) клетки. В дальнейшем интенсивность Т-клеточных иммунных реакций резко снижается, при наличии же метастазов в лимфоузлах они практически не выражены, что определяется и на ультраструктурном уровне [4]. Все это приводит к генерализации опухолевого процесса, чему способствует ряд факторов: во-первых, это уменьшение числа CD 1 и CD 10(+) ранних (бластных) форм, возможно, как результат микро- циркуляторных расстройств [2], которые блокируют рециркуляцию через посткапиллярные венулы; во-вторых, блокада гуморальными антителами — CD 20 (+) и антииммуноглобулинпозитивными клетками — Т-клеточного цитотоксического эффекта [7] и, в-третьих, недостаток Т-супрессоров, которые контролируют дифференцировку В-клеток и угнетают продукцию иммуноглобулинов [3].

[1] В настоящее время не разработаны антитела, способные разделить хелперы и индукторы, а также киллеры и супрессоры.

About the authors

D. E. Tsyplakov

Kazan State Medical University

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan

S. V. Petrov

Kazan State Medical University

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan

N. Sh. Shamsutdinov

Kazan State Medical University

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan

References

Supplementary files