Развитие вторичной митохондриальной дисфункции мононуклеарных лейкоцитов крови у больных хронической обструктивной болезнью легких и хроническим бронхитом
- Авторы: Бельских Э.С.1, Урясьев О.М.1, Звягина В.И.1, Фалетрова С.В.1
-
Учреждения:
- Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова
- Выпуск: Том 99, № 5 (2018)
- Страницы: 741-747
- Тип: Теоретическая и клиническая медицина
- Статья получена: 10.10.2018
- Статья опубликована: 10.10.2018
- URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/10295
- DOI: https://doi.org/10.17816/KMJ2018-741
- ID: 10295
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Цель. Изучить показатели энергетического обмена и окислительного стресса в мононуклеарных лейкоцитах периферической крови и оценить возможность развития митохондриальной дисфункции при хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) и хроническом бронхите.
Материалы исследования. В исследование было включено 50 пациентов в возрасте от 40 до 75 лет с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) или хроническим бронхитом. Первая группа включала 13 пациентов с хроническим бронхитом. В соответствии со спирометрической классификацией GOLD вторая и третья группы включали пациентов с ХОБЛ средней степени тяжести (ХОБЛ 2) (n=17) и тяжелой ХОБЛ (ХОБЛ 3) (n=20) соответственно. В выделенных мононуклеарных лейкоцитах определяли активность супероксиддисмутазы (СОД), сукцинатдегидрогеназы (СДГ), концентрацию сукцината, проводили комплексную оценку окислительной модификации белков.
Результаты. Было установлено, что у больных хроническим бронхитом по сравнению с больными с ХОБЛ 2 и ХОБЛ 3 в мононуклеарных лейкоцитах наблюдалась большая активность СОД в 3,38 раз (p=0,0025) и 3,15 раз (р=0,0058), активность СДГ в 4,55 (p=0,0281) и 2,5 раз (p=0,0263), концентрация сукцината в 2,05 (p=0,0133) и 1,89 (p=0,005) раз соответственно. Уровень спонтанно окислено модифицированных белков в группе больных с хроническим бронхитом снижался в 2,45 (p=0,0176) и 2,94 (p=0,0168) раз по сравнению с больными групп 2 и 3 соответственно. Отмечалось уменьшение резервно-адаптационного потенциала окислительной модификации белков при ХОБЛ в виде увеличения соотношения спонтанных окисленно-модифицированных белков к металл-индуцированным в 1,58 раз (p=0,0301) между группами 1 и 2, и в 1,44 раз между группами 2 и 3 (p=0,0446).
Выводы. В мононуклеарных лейкоцитах больных ХОБЛ наблюдается развитие вторичной митохондриальной дисфункции, сопровождающейся выраженным окислительным повреждением лимфоцитов и моноцитов. Больных с тяжелой ХОБЛ по сравнению с больными с ХОБЛ средней тяжести отличает меньший резервно-адаптационный потенциал окислительной модификации белков мононуклеарных лейкоцитов, что, вероятно, отражает более тяжелое течение заболевания.
Полный текст
Введение
В соответствии с современными представлениями хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) является лидирующей причиной заболеваемости и смертности во всем мире, представляя собой значительное и постоянно растущее социально-экономическое бремя [1]. Установлено, что наиболее распространенным и изученным фактором риска ХОБЛ и хронического бронхита является курение, способное, в свою очередь, индуцировать развитие вторичной митохондриальной дисфункции [2].
Под митохондриальной дисфункцией понимается нарушение любого из процессов, протекающих в митохондриях, например, таких как: окислительное фосфорилирование, участие в апоптозе, регуляция цитоплазматического и митохондриального уровня кальция, синтез и катаболизм некоторых метаболитов [3]. Митохондриальная дисфункция является важным патогенетическим звеном, обуславливающим развитие системных нарушений при ХОБЛ [2]. Так установлено, что скелетные мышцы от пациентов с ХОБЛ характеризуются уменьшенным количеством митохондрий, сниженным биогенезом митохондрий, уменьшенной активностью комплексов дыхательной цепи, повышенной продукцией активных форм кислорода, что создает предпосылки для нарушения функции скелетных мышц у больных ХОБЛ при обострениях и в значительной мере обусловливают уменьшение толерантности к физической нагрузке [4, 5]. Наряду с системными эффектами важным аспектом в патогенезе ХОБЛ является персистирующее воспаление, которое сохраняется даже после прекращения курения [5, 6].
Определение маркеров митохондриальной дисфункции, тесно связанной с развитием окислительного стресса (ОС) и формированием патологической воспалительной реакции, у больных ХОБЛ наряду с клиническими показателями может стать дополнительным критерием, который позволит разделять больных на подгруппы с целью оптимизации подбора терапии. Учитывая, что для функционирования митохондрий большое значение имеют процессы адаптации к гипоксии, срыв которых связан с образованием избытка активных форм кислорода (АФК), представляется целесообразным исследование активности ферментов дыхательной цепи и их субстратов у больных ХОБЛ и хроническим бронхитом [5, 7, 8]. Избыточное образование АФК способствует развитию ОС с повреждением всех клеточных структур, в том числе белков. В связи с этим исследование карбонильных производных белков позволит провести как количественную оценку выраженности ОС, так и, возможно, охарактеризовать качественные аспекты окислительного повреждения при ХОБЛ и хроническом бронхите [9, 10]. По данным ряда исследователей, периферические лимфоциты, являясь мигрирующими клетками организма, способны отражать изменения, протекающие в других тканях, и удобны для исследования в клинической практике [11].
Целью данного пилотного исследования является изучение показателей энергетического обмена и окислительного стресса моноядерных лейкоцитов и оценка возможности развития митохондриальной дисфункции в лимфоцитах и моноцитах при ХОБЛ и хроническом бронхите.
Материалы и методы
Проведённое исследование одобрено ЛЭК РязГМУ (протокол № 2 от 7.10.2016 г.) и соответствует требованиям Надлежащей Клинической Практики (GCP) и Хельсинской декларации Всемирной Медицинской Ассоциации «Этические принципы проведения медицинских исследований с участием людей в качестве субъектов исследования».
В исследование было включено 50 пациентов — мужчин курильщиков в возрасте от 40 до 75 лет (медиана — 67 [61; 70] лет), проходивших лечение в ГБУ РО «ОКБ» (г. Рязань) по поводу обострения ХОБЛ или хронического бронхита. Критериями включения в группу больных ХОБЛ служили подписанное информированное согласие, возраст от 40 до 75 лет, исходный постбронходилатационный модифицированный индекс Тиффно ≤0,7. Для группы больных хроническим бронхитом: подписанное информированное согласие, возраст от 40 до 75 лет, наличие хронического бронхита в анамнезе более 2-х лет. Критериями исключения для всех групп служили хирургические вмешательства на легких в анамнезе, злоупотребление алкоголем и наркотиками, пациенты с легочными заболеваниями, отличными от пациентов ХОБЛ и больных хроническим бронхитом, или имеющие значимые воспалительные заболевания, другие хронические заболевания внутренних органов в фазе декомпенсации, моноцитоз (>11 %) в результатах общего анализа крови. Больные были разделены на три группы. Первая группа включила 13 пациентов с хроническим бронхитом, средний возраст которых составил 68[61;71] лет. В соответствии со спирометрической классификацией GOLD вторая группа включала пациентов с ХОБЛ 2 (по 50 % ≤объем форсированного выдоха за 1 секунду n=17), средний возраст больных в этой группе составил 67[61;72] лет. Третья группа включала пациентов с ХОБЛ 3 (30 % ≤объем форсированного выдоха за 1 секунду n=20), средний возраст в группе — 68[62, 5;72] лет. Все исследуемые группы были сопоставимы по полу и возрасту (p1-2=0,79; p1-3=0,967, p2-3=0,59).
Всем пациентам проводилось общеклиническое обследование, определение функции внешнего дыхания с помощью спирометра MicroLab (Micro Medical, Великобритания). Забор крови осуществлялся утром натощак на второй день госпитализации путем венепункции с помощью вакуумных систем для забора крови из кубитального доступа с помощью пробирок, содержащих гепарин натрия, разделительный гель и раствор фиколла для создания градиента плотности (BD Vacutainer CPT, США).
Выделение лимфоцитов из крови проводилось путем центрифугирования забранной крови в пробирках BD CPT при относительном центробежном ускорении 1 600 в течение 16 минут в соответствии с инструкцией производителя. После центрифугирования забирали плазму с лимфоцитами и моноцитами из содержимого пробирки над разделительным гелем. Мононуклеарные лейкоциты отделяли от плазмы путем центрифугирования при 3 000 оборотах/минуту в течение 10 минут. Полученные клетки отмывали 0,9 % NaCl с последующим центрифугированием при 3 000 оборотах/минуту в течение 5 минут троекратно.
Выделенные мононуклеарные лейкоциты ресуспендировали в 1 мл дистиллированной воды, получая суспензию. В 20 мкл суспензии подсчитывали количество клеток, окрашенных раствором метиленового синего в камере Горяева, с последующим их перерасчетом на объем суспензии. После завершения подсчета клеток к 1 мл суспензии добавляли детергент (10 мкл Triton X-100) и замораживали её. После разморозки суспензию использовали для определения показателей окислительного стресса, концентрации янтарной кислоты и активности ферментов с последующим пересчетом показателей на 106 клеток/мл суспензии.
Активность супероксиддисмутазы (СОД) определяли фотометрически по торможению реакции аутоокисления кверцетина [12]. Активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) определяли фотометрически по реакции восстановления гексацианоферрата (III) калия [13]. Концентрацию сукцината определяли с помощью набора Succinate Colorimetric Assay Kit (Sigma-Aldrich, США). Окислительную модификацию белков определяли методом, основанным на реакции взаимодействия карбонильных групп и иминогрупп окисленных аминокислотных остатков с 2,4-динитрофенилгидразином с образованием 2,4-динитрофенилгидразонов, обладающих специфическим спектром поглощения в ультрафиолетовой и видимой областях спектра. Общее количество продуктов окислительной модификации белков (ОМБ) определяли по суммарной площади под кривой спектра поглощения. Затем рассчитывали доли ранних и поздних маркеров окислительной деструкции белков — альдегиддинитрофенилгидразонов (АДНФГ) и кетондинитрофенилгидразонов (КДНФГ) нейтрального и основного характера. АДНФГ нейтрального характера имеют максимумы поглощения при 230, 254, 270, 280, 356 нм, а основного — при 428 и 430 нм. Максимумы абсорбции света для КДНФГ нейтрального характера наблюдаются при 363 и 370 нм, а для основных — при 434, 520, 535 нм. АДНФГ являются маркерами фрагментации белков, а КДНФГ — их агрегации. Нейтральный или основный характер карбонильных производных характеризует степень повреждения нейтральных и основных аминокислот. Дополнительно рассчитывался резервно-адаптационный потенциал белков как доля в % суммарной площади под спектром абсорбции света спонтанной ОМБ к площади ОМБ, индуцированной с помощью реакции Фентона (последняя принималась за 100 %). Чем ниже доля продуктов спонтанного окисления, тем выше резервно-адаптационный потенциал [9].
Статистическая обработка результатов проводилась с помощью программ Microsoft Office Excel 2016 и StatPlus 6.0. Соответствие выборок нормальному распределению проверяли посредством критерия Шапиро — Уилка. Так как распределение в выборках носило характер отличный от нормального, применялся критерий Манна — Уитни для попарного сравнения исследуемых групп. Статистически значимыми считали отличия при вероятности нулевой гипотезы об отсутствии различий p≤0,05.
Результаты и обсуждение
Из результатов, представленных в табл. 1, следовало, что для больных с ХОБЛ 2 (↓1-2 в 3,38 раз, p1-2=0,0025) и ХОБЛ 3 (↓1-3 в 3,15 раз, p1-3=0,0058) был характерен более низкий уровень активности СОД по сравнению с больными хроническим бронхитом. Наряду с этим, оценка активности СОД в мононуклеарных лейкоцитах периферической крови при ХОБЛ средней тяжести (группа 2) и тяжелой ХОБЛ (группа 3) не выявила статистически значимых отличий (p=1,0).
Таблица 1. Биохимические показатели мононуклеарных лейкоцитов крови исследуемых групп больных
Исследуемый показатель | Хронический бронхит (группа 1) (n=13) | ХОБЛ 2 (группа 2) (n=17) | ХОБЛ 3 (группа 3) (n=20) |
Активность СОД, у.е./106 клеток в 1 мл суспензии | (p1-2=0,0025 p1-3=0,0058) | ↓1-2 в 3,38 раз | ↓1-3 в 3,15 раз |
Активность СДГ, нмоль сукцината/мин* 106 клеток в 1 мл суспензии | (p1-2=0,0281 p1-3=0,0263) | ↓1-2 в 4,55 раз | ↓1-3 в 2,5 раз |
Концентрация сукцината, нмоль/106 клеток в 1 мл суспензии | 560[464;763] (p1-2=0,0133 p1-3=0,005) | 273[241;446] ↓1-2 в 2,05 раз | 296[381;361] ↓1-3 в 1,89 раз |
Результаты представлены в форме: медиана [1-ый квартиль; 3-ий квартиль]; СОД – супероксиддисмутаза, СДГ – сукцинатдегидрогеназа; n — количество больных в группе исследуемых.
Более низкий показатель активности СОД мононуклеарных лейкоцитов позволил сделать предположение о, вероятно, более выраженном повреждении лимфоцитов и моноцитов в условиях окислительного стресса, являющегося значимой частью патогенеза ХОБЛ [1]. Это предположение нашло подтверждение в увеличении общего уровня спонтанно окисленных белков моноядерных лейкоцитов периферической крови у больных с ХОБЛ 2 (↑1-2 в 2,45 раз, p1-2=0,0176) и ХОБЛ 3 (↑1-3 в 2,94 раз, p1-3=0,0168) по сравнению с показателем больных с хроническим бронхитом (табл. 2). При этом прирост площади под кривой поглощения (S) АДНФГ (↑1-2 в 2,55 раз, p1-2=0,0034; ↑1-3 в 3,23 раз, p1-3=0,0048) и КДНГФ (↑1-2 в 2,49 раз, p1-2=0,0034; ↑1-3 в 2,92 раз, p1-3=0,0126) в ультрафиолетовой части спектра у больных группы 2 и группы 3 указывал на преимущественное повреждение аминокислотных остатков нейтрального характера по сравнению с показателями группы 1. Оценка соотношения ранних (АДНФГ) и поздних (КДНФГ) маркеров окислительного повреждения в мононуклеарных лейкоцитах у больных с ХОБЛ (%, ХОБЛ 2: АДНФГ 74,60[74, 46;75, 31], КДФНГ 25,40[24, 69;25, 54], ХОБЛ3: АДНФГ 74,25 [72, 84;75, 63], КДНФГ 25,75[24, 37;27, 16]) и с хроническим бронхитом (%, АДНФГ 72,93[71, 11;73, 28], КДФНГ 27,07[26, 72;28, 89]) выявила незначительное увеличение доли ранних маркеров окислительной деструкции белков.
Таблица 2. Содержание спонтанно-окисленных производных белков в мононуклеарных лейкоцитах
периферической крови исследуемых групп больных
S АДНФГ uv | S КДНФГ uv | SАДНФГ vs | S КДНФГ vs | S ОМБ | |
Хронический бронхит (группа 1), (n=13) | 26,22 (p1-2=0,0034 p1-3=0,0048) | 10,30 (p1-2=0,0034 p1-3=0,0126) | 10,58 | 2,69 | (p1-2=0,0176 p1-3=0,0168) |
ХОБЛ 2 (группа 2), (n=17) | 66,90 ↑1-2 в 2,55 раз | 25,70 ↑1-2 в 2,49 раз | 26,91 | 4,56 | 124,65 ↑1-2 в 2,45 раз |
ХОБЛ 3 (группа 3), у.е./106 клеток в 1 мл суспензии (n=20) | 84,59 ↑1-3 в 3,23 раз | 30,07 ↑1-3 в 2,92 раз | 28,51 | 5,53 | 149,55 ↑1-3 в 2,94 раз |
Результаты представлены в форме: медиана [1-й квартиль; 3-й квартиль]; АДНФГ — альдегиддинитрофенилгидразоны, КДНФГ — кетондинитрофенилгидразоны, S — значение площади под кривой, uv — в ультрафиолетовой области спектра, vs — в видимой области спектра; n — количество больных в группе исследуемых.
Увеличение соотношения продуктов спонтанного окисления к индуцируемому с помощью реакции Фентона демонстрировало более низкий резервно-адаптационный потенциал мононуклеарных лейкоцитов крови у больных 2-й и 3-й групп в сравнении с больными хроническим бронхитом, что, возможно, обуславливало нарушение способности мононуклеарных лейкоцитов поддерживать функциональную активность в условиях окислительного стресса при обострении заболевания (табл. 3).
Таблица 3. Отношение значений динитрофенилгидразонов мононуклеарных лейкоцитов, полученных
при спонтанном окислении, к значениям, полученным при индуцированном окислении белка
Хронический бронхит (группа 1) (n=13) | ХОБЛ 2 (группа 2) (n=17) | ХОБЛ 3 (группа 3) (n=20) | |
АДФНГ uv, % | p1-2=0,017 p1-3=0,0015 | ↑1-2 в 1,54 раз | ↑1-3 в 2,17 раз |
АДФНГ vs, % | |||
КДФНГ uv, % | p1-2=0,017 p1-3=0,0067 | ↑1-2 в 1,37 раз | ↑1-3 в 2,25 раз |
КДФНГ vs, % | |||
Общая ОМБ, % | p1-2=0,0301 p1-3=0,0016 | p2-3=0,0446 ↑1-2 в 1,58 раз | ↑1-3 в 2,28 раз ↑2-3 в 1,44 раз |
Нейтральные, % | p1-2=0,017 p1-3=0,0015 | ↑1-2 в 1,49 раз | ↑1-3 в 2,16 раз |
Основные, % |
Результаты представлены в форме: медиана [1-й квартиль; 3-й квартиль]; АДНФГ — альдегиддинитрофенилгидразоны, КДНФГ — кетондинитрофенилгидразоны, uv — в ультрафиолетовой области спектра, vs — в видимой области спектра.
При сравнении больных 2-й и 3-й групп показатели спонтанной окислительной модификации белков статистически значимо не отличались (+19,9%, p=0,96). При оценке соотношения спонтанной и металл-индуцируемой окислительной модификации белков отмечалось увеличение соотношения у больных с ХОБЛ 3 (+44,18%, p=0,0446), что указывало на снижение резервно-адаптационного потенциала окислительной модификации белков в мононуклеарных лейкоцитах больных 3-й группы. Возможно, это отражало большую интенсивность окислительного стресса, связанного с развитием обострения заболевания.
Таким образом, мононуклеарные лейкоциты больных с ХОБЛ по сравнению с больными с хроническим бронхитом при обострении характеризовались большей выраженностью окислительного повреждения и снижением антиоксидантной защиты, что, вероятно, создавало условия для нарушения их функциональной активности.
При изучении показателей энергообмена мононуклеарных лейкоцитов у больных с ХОБЛ по сравнению с больными с хроническим бронхитом была выявлена более низкая активность СДГ [↓1-2 в 4,55 раз, p1-2=0,0281; ↓1-3 в 2,55 раз, p1-3=0,0263] и меньшая концентрация сукцината [↓1-2 в 2,05 раз, p1-2=0,0133; ↓1-3 в 1,89 раз, p1-3=0,005]. В гипоксических условиях активация функционального комплекса II с соответствующим повышением активности СДГ позволяет митохондриям компенсаторно сохранить поступление восстановительных эквивалентов в цепь переноса электронов с сохранением энергопродуцирующей функции. В то же время принято считать, что при гипоксии сукцинат аккумулируется в клетках, обеспечивая реализацию адаптивных процессов, связанных с переключением путей окисления митохондриальных субстратов [8]. Выявленные отличия активности СДГ и концентрации сукцината, являющегося его субстратом, указывают, вероятно, на ингибирование процессов цикла Кребса по механизму отрицательной обратной связи в связи с накоплением избытка восстановленных коферментов и нарушение адаптивных процессов в митохондриях мононуклеарных лейкоцитов. Такое состояние в лимфоцитах и моноцитах у больных ХОБЛ при обострении, возможно, было связано с развитием острой гипоксии, когда на фоне быстрого снижения концентрации кислорода крови уменьшалось его содержание в митохондриях, что сопровождалось нарушением процесса переноса электронов с восстановленных коферментов на комплексы дыхательной цепи с образованием избытка активных форм кислорода.
Выявленные изменения показателей энергетического обмена в совокупности с исследованными маркерами окислительного стресса, отражающими окислительное повреждение белков лимфоцитов и моноцитов, обнаруживали декомпенсацию адаптивных процессов митохондрий, что косвенно подтверждало развитие митохондриальной дисфункции лимфоцитов и моноцитов у больных ХОБЛ по сравнению с больными хроническим бронхитом.
Выводым
У больных с ХОБЛ наблюдается нарушение процессов энергетического обмена митохондрий и развитие вторичной митохондриальной дисфункции в мононуклеарных лейкоцитах периферической крови.
В нашем исследовании выявлено, что в мононуклеарных лейкоцитах больных с ХОБЛ по сравнению с больными хроническим бронхитом регистрируется тенденция к снижению уровня антиоксидантной защиты и большей выраженности окислительного повреждения белков, что создает предпосылки для нарушения их функциональной активности.
Больные с тяжелой формой заболевания (ХОБЛ 3) характеризуются более выраженным повреждением мононуклеарных лейкоцитов, чем больные со средней степенью тяжести заболевания (ХОБЛ 2), что отражается в статистически значимом уменьшении резервно-адаптационного потенциала окислительной модификации белков.
Исследование выполнено в рамках реализации внутривузовского гранта ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России № 2/17 «Исследование митохондриальной дисфункции лимфоцитов крови у больных хронической обструктивной болезнью легких как возможного предиктора тяжести заболевания».
Авторы выражают благодарность коллективу пульмонологического отделения ГБУ РО ОКБ г. Рязань за помощь в проведении исследования.
Об авторах
Эдуард Сергеевич Бельских
Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова
Автор, ответственный за переписку.
Email: ed.bels@yandex.ru
г. Рязань, Россия
Олег Михайлович Урясьев
Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова
Email: ed.bels@yandex.ru
г. Рязань, Россия
Валентина Ивановна Звягина
Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова
Email: ed.bels@yandex.ru
г. Рязань, Россия
Светлана Васильевна Фалетрова
Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова
Email: ed.bels@yandex.ru
г. Рязань, Россия
Список литературы
- GOLD 2018 Global Strategy for the Diagnosis, Management and Prevention of COPD. Available at: http://goldcopd.org/wp-content/uploads/2017/11/GOLD-2018-v6.0-FINAL-revised-20-Nov_WMS.pdf
- Agrawal A., Mabalirajan U. Rejuvenating cellular respiration for optimizing respiratory function: targeting mitochondria. Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 2016; 310 (2): 103-113. doi: 10.1152/ajplung.00320.2015.
- Brand M.D., Nicholls D.G. Assessing mitochondrial dysfunction in cells. Biochem. J. 2011; 437 (3): 297-312. doi: 10.1042/BJ4370575u.
- Gayan-Ramirez G., Decramer M. Mechanisms of striated muscle dysfunction during acute exacerbations of COPD. J. Appl. Physiol. 2013; 114 (9): 1291-1299. doi: 10.1152/japplphysiol.00847.2012.
- Lerner C.A., Sundar I.K., Rahman I. Mitochondrial redox system, dynamics, and dysfunction in lung inflammaging and COPD. Int. J. Biochem. Cell Biol. 2016; 81: 294-306. doi: 10.1016/j.biocel.2016.07.026.
- Hoffmann R.F., Zarrintan S., Brandenburg S.M. et al. Prolonged cigarette smoke exposure alters mitochondrial structure and function in airway epithelial cells. Respir. Res. 2013; 14 (1): 97. doi: 10.1186/1465-9921-14-97.
- Zinellu E., Zinellu A., Fois A.G. et al. Circulating biomarkers of oxidative stress in chronic obstructive pulmonary disease: a systematic review. Respir. Res. 2016; 17 (1): 150. doi: 10.1186/s12931-016-0471-z.
- Lukyanova L.D., Kirova Y.I. Mitochondria-controlled signaling mechanisms of brain protection in hypoxia. Front. Neurosci. 2015; 9: 320. doi: 10.3389/fnins.2015.00320.
- Фомина М.А., Абаленихина Ю.В. Окислительная модификация белков тканей при изменении синтеза оксида азота. М.: Изд-во ГЭОТАР-Медиа. 2018; 192 с.
- Фомина М.А., Абаленихина Ю.В. Способ комплексной оценки содержания продуктов окислительной модификации белков в тканях и биологических жидкостях: методические рекомендации. ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава России. Рязань: РИО РязГМУ. 2014; 60 с.
- Ли Л.А., Лебедько О.А., Козлов В.К. Оценка дисфункции митохондрий при внебольничной пневмонии у детей. Дальневосточный медицинский журнал. 2015; 2: 30-36.
- Костюк В.А., Потапович А.И., Ковалева Ж.В. Простой и чувствительный метод определения активности супероксиддисмутазы, основанный на реакции окисления кверцетина. Вопросы медицинской химии. 1990; 2: 88-91.
- Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен). Под ред. М.И. Прохоровой. Л.: Изд-во Ленинград. ун-та. 1982; 327 с.
Дополнительные файлы
![](/img/style/loading.gif)