BACKGROUND: Cutaneous melanoma is one of the most common malignant tumors of the skin.
AIM: To investigate the clinical and morphological features, as well as the expression of transcription factors, growth factors, and components of the AKT/m-TOR signaling pathway in aspirates obtained from tumor tissue following fine-needle biopsy in patients with cutaneous and mucosal melanoma.
METHODS: The study included 41 patients with verified melanoma of the skin at various sites and mucosal melanoma of the nasal cavity, stages T1a–4bN0M0 (I–IV), as well as 18 patients with cutaneous nevi at different sites. The age of the patients ranged from 45 to 72 years; 25 patients were men (62%) and 16 were women (38%). Expression of signaling cascade components was evaluated using real-time polymerase chain reaction. The BRAF mutation status was determined using allele-specific real-time polymerase chain reaction. Statistical analysis was performed using nonparametric methods (Mann–Whitney U test; Kruskal–Wallis test). A p-value of <0.05 was considered statistically significant.
RESULTS: Aspirates from melanoma tissue showed increased expression of the following markers: AKT, 13.47-fold; c-RAF, 16.86-fold; m-TOR, 90.25-fold; PDK1, 63.2-fold; VEGFR2, 7.28-fold; CAIX, 801.69-fold; VHL, 398-fold; PD-L1, 28.18-fold; AMPK, 67.36-fold; and LC3B, 97-fold. In ulcerated tumors, a decrease in several important molecular markers was observed: 4EBP1, 13.39-fold (p = 0.0048); NF-κB p50, 19.38-fold (p = 0.0015); and VHL, 6.15-fold (p = 0.004). When comparing molecular marker expression by Clark’s level of invasion (from the epidermis to subcutaneous adipose tissue), AKT expression increased from 5.94-fold in group 3 to 56.96-fold in group 5, compared to group 2 (p = 0.0387). In group 3, there was also a marked increase in GSK-3β expression (30.49-fold) and PD-1 expression (90.8-fold; p = 0.0216), accompanied by a significant decrease in HIF-1 expression (891.44-fold; p = 0.004).
CONCLUSION: Aspirates from BRAF-negative tumors revealed evidence of autophagy activation and enhanced tumor immunogenicity. In particular, elevated AKT kinase levels were accompanied by increased expression of autophagosome protein and the PD-1 receptor.
Обоснование. Меланома кожи является одной из наиболее распространённых злокачественных опухолей кожи.
Цель исследования. Изучить клинико-морфологические особенности и экспрессию транскрипционных, ростовых факторов и компонентов сигнального пути AKT/m-TOR у пациентов с меланомой кожи и слизистых оболочек в аспиратах, полученных после тонкоигольной биопсии опухолевой ткани.
Методы. В исследование включён 41 пациент с верифицированной меланомой кожи различных локализаций и слизистых оболочек полости носа стадий Т1а–4вN0M0 (I–IV), а также 18 пациентов с невусами кожи различных локализаций. Возраст больных составил 45–72 года: мужчин — 25 (62%), женщин — 16 (38%). Экспрессию компонентов сигнальных каскадов исследовали методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Статус мутации BRAF определяли методом аллель-специфичной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Статистический анализ выполняли с применением непараметрических методов (критерий Манна–Уитни, критерий Краскела–Уоллиса). Уровень статистической значимости принимали равным p <0,05.
Результаты. В аспиратах опухолевой ткани при меланоме наблюдалось увеличение экспрессии: AKT — в 13,47 раза, c-RAF — в 16,86 раза, m-TOR — в 90,25 раза, PDK1 — в 63,2 раза, VEGFR2 — в 7,28 раза, CAIX — в 801,69 раза, VHL — в 398 раз, PD-L1 — в 28,18 раза, AMPK — в 67,36 раза и LC3B — в 97 раз. При изъязвлении опухоли обнаружено снижение экспрессии ряда важных молекулярных маркёров: 4EBP1 — в 13,39 раза (р=0,0048), NF-kB p50 — в 19,38 раза (p=0,0015), а VHL — в 6,15 раза (p=0,004). При сравнении экспрессии молекулярных факторов в зависимости от глубины инвазии по Кларку (от эпидермиса до подкожной жировой клетчатки) выявлено, что уровень AKT возрастал с 5,94 раза в 3-й группе до в 56,96 раза в 5-й группе по сравнению со 2-й (p=0,0387). В 3-й группе также наблюдалось многократное повышение экспрессии GSK-3β (в 30,49 раза) и PD-1 (в 90,8 раза; p=0,0216), сопровождавшееся снижением экспрессии HIF-1 (в 891,44 раза; p=0,004).
Заключение. В аспиратах BRAF-негативных опухолей выявлены признаки активации аутофагии и усиления иммуногенности опухоли. В частности, зафиксировано повышение киназы AKT, сопровождавшееся увеличением экспрессии белка аутофагосом и рецептора PD-1.
论证：皮肤黑色素瘤是最常见的恶性皮肤肿瘤之一。
目的：研究肿瘤组织细针活检后获得的抽吸物中皮肤和粘膜黑素瘤患者转录，生长因子和AKT/m-TOR信号通路组分的临床和形态学特征和表达。
方法：该研究包括41名患有各种局部化和鼻腔粘膜的皮肤黑素瘤的患者T1a–4bN0M0（I–IV），以及18名患有各种局部化皮肤痣的患者。患者的年龄为45—72岁：男性—25（62％），女性-16（38％）。通过实时聚合酶链式反应研究信号级联的组分的表达。通过实时等位基因特异性聚合酶链反应确定BRAF突变状态。使用非参数方法（曼-惠特尼检验，克拉斯克尔至瓦利斯检验）进行统计分析。假设统计显着性水平为p <0.05。
结果：在患有黑素瘤的肿瘤组织中，观察到表达增加：AKT — 13.47倍，c-RAF — 16.86倍，m — TOR-90.25倍，PDK1 — 63.2倍，VEGFR2 — 7.28倍，CAIX — 801.69倍，VHL — 398倍，PD-L1 — 28.18倍，AMPK — 67.36倍和LC3B — 97倍。当肿瘤溃疡时，检测到许多重要分子标志物的表达减少：4EBP1—由13.39倍（p=0.0048），NF-κB p50 — 由19.38倍（p=0.0015）和VHL — 由6.15倍（p=0.004）。当比较取决于克拉克侵袭深度（从表皮到皮下脂肪组织）的分子因子的表达时，发现与组2相比，AKT水平从组3的5.94倍增加到组5的56.96倍（p=0.0387）。在第3组中，GSK-3b表达（30.49倍）和PD-1（90.8倍；p=0.0216）也有倍数增加，伴有HIF-1表达减少（891.44倍；p=0.004）。
结论：BRAF阴性肿瘤的抽吸物显示自噬激活和肿瘤免疫原性增加的迹象。特别是，记录了AKT激酶的增加，伴随着自噬体蛋白和PD-1受体表达的增加。