Aim. Development of methods for the determination of felodipine in blood and plasma.
Methods. The study object was felodipine [3-ethyl-5-methyl-4-(2,3-dichlorophenyl)-2,6-dimethyl-1,4-dihydropyridine-3,5-dicarboxylate]. The experiments were carried out on model mixtures of felodipine with blood and human blood plasma. Acetone was proposed as an isolating agent for the extraction of felodipine from biological fluids. To identify and quantify felodipine in extracts from blood and plasma, the methods of thin-layer chromatography, spectrophotometry and gas-liquid chromatography in combination with mass spectrometry were proposed.
Results. The possibility of using acetone as an isolating agent to extract felodipine from biological fluids is demonstrated. The optimal conditions for the extraction of felodipine with acetone were found to be achieved already at 2-fold infusion of a biological object with an isolating agent, if the mass ratio of isolating liquid and biological material at each infusion stage is at least 2:1, and the infusion time is at least 30 minutes. Optimal felodipine purification conditions were achieved in a macrocolumn (15×1 cm) of Silasorb S-18 sorbent of 30 μm with elution of the substance with the polar eluent acetonitrile-water (7:3). The methods of determining felodipine in the blood and plasma were developed. With the content of felodipine of 25 mg in 25 g of biological fluid, the developed methods allow determining 86.01–87.86% in blood and 95.64–96.18% of the substance in blood plasma. The values of the detection limit of felodipine in the blood and plasma by the developed methods are 200 μg/100 g and 150 μg/100 g, respectively.
Conclusion. Methods for the determination of felodipine in biological fluids were developed based on isolating with acetone and purification in the Silasorb S-18 sorbent column; use of these methods allows determining up to 87.86% of the analyte in the blood and up to 96.18% in the blood plasma.
Цель. Разработка методик определения фелодипина в крови и плазме крови.
Методы. Объект исследования — фелодипин [3-этил-5-метил-4-(2,3-дихлорофенил)-2,6-диметил-1,4-дигидропиридина-3,5-дикарбоксилат]. Эксперименты проводили на модельных смесях фелодипина с кровью и плазмой крови человека. В качестве изолирующего агента для извлечения фелодипина из биологических жидкостей предложен ацетон. Для идентификации и количественного определения фелодипина в извлечениях из крови и плазмы крови предложены методы тонкослойной хроматографии, спектрофотометрии и газо-жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией.
Результаты. Показана возможность применения ацетона в качестве изолирующего агента для извлечения фелодипина из биологических жидкостей. Установлено, что оптимальные условия извлечения фелодипина ацетоном достигаются уже при 2-кратном настаивании биологического объекта с изолирующим агентом, если массовое соотношение изолирующей жидкости и биологического материала на каждом этапе настаивания составляет не менее 2:1, а продолжительность настаивания — минимум 30 мин. Оптимальные условия очистки фелодипина достигались в макроколонке (15×1 см) сорбента «Силасорб С-18» 30 мкм при элюировании вещества полярным элюентом ацетонитрил-вода (7:3). Разработаны методики определения фелодипина в крови и плазме крови. При содержании фелодипина в количестве 25 мг в 25 г биологической жидкости разработанные методики позволяют определять в крови 86,01–87,86%, в плазме крови 95,64–96,18% данного вещества. Значения предела обнаружения фелодипина в крови и плазме крови разработанными методиками составляют 200 мкг/100 г и 150 мкг/100 г соответственно.
Вывод. Разработаны методики определения фелодипина в биологических жидкостях на основе изолирования ацетоном и очистки в колонке сорбента «Силасорб С-18»; используя данные методики, удаётся определить до 87,86% аналита в крови и до 96,18% в плазме крови.