Background. Determination of Rh-affiliation is mandatory for donors and recipients, surgical patients, pregnant women, etc. There are variants of the D antigen that are difficult to identify by serological methods, for example, a weak D antigen.
Aim. Determination of Rh-affiliation using genotyping in difficult cases, when the use of serological methods does not allow obtaining a reliable result.
Material and methods. We studied blood samples from donors (n=18), pregnant women (n=17) and patients with hematological diseases (n=15): 22 men and 28 women, median age 36 years (25 to 54 years). Serologically, antigen D was determined by gel technology in ID-cards and in an indirect antiglobulin test with anti-D-IgG reagent. Weak D antigen variants were diagnosed and phenotype determined using polymerase chain reaction with allele-specific primers. For significance of differences in the frequency of types of weak antigen D, a nonparametric statistical method using a two-tailed Fisher's exact test was used. Differences were considered statistically significant at p <0.05.
Results. The use of genotyping made it possible to detect the presence of a weak antigen D in 41 samples. Its specificity was represented by the following types: 1; 1.1; 2; 3. Other types of weak antigen D [4; 4.0; 4.1; 4.2 (DAR); 5; 11; 14; 15; 17] were absent. The study of the phenotype of erythrocyte antigens of the Rhesus system using genotyping revealed the predominance of the Ccee phenotype in people with a weak D antigen. Significant differences in the frequency of types of this antigen were revealed.
Conclusion. The use of molecular genetic typing made it possible to determine the types of the weak antigen D and to accurately determine the Rh-affiliation of the subjects.
Актуальность. Определение резус-принадлежности обязательно для доноров и реципиентов, хирургических пациентов, беременных и др. Существуют варианты антигена D, которые сложно идентифицировать серологическими методами, например слабый антиген D.
Цель. Определение резус-принадлежности с помощью генотипирования в сложных случаях, когда использование серологических методов не позволяет получить достоверный результат.
Материал и методы исследования. Исследовали образцы крови доноров (n=18), беременных (n=17) и пациентов с гематологическими заболеваниями (n=15): 22 мужчин и 28 женщин, медиана возраста 36 лет (от 25 до 54 лет). Серологически антиген D определяли гелевой технологией в ID-картах и в непрямом антиглобулиновом тесте с реактивом анти-D-IgG. Диагностику вариантов слабого антигена D и определение фенотипа проводили с использованием полимеразной цепной реакции с помощью аллель-специфических праймеров. Для достоверности различий частоты типов слабого антигена D применяли непараметрический статистический метод с использованием двустороннего точного критерия Фишера. Различия рассматривали как статистически значимые при p <0,05.
Результаты. Использование генотипирования позволило выявить присутствие слабого антигена D в 41 исследуемом образце. Его специфичность была представлена следующими типами: 1; 1.1; 2; 3. Остальные типы слабого антигена D [4; 4.0; 4.1; 4.2 (DAR); 5; 11; 14; 15; 17] отсутствовали. Исследование фенотипа антигенов эритроцитов системы резус с использованием генотипирования выявило преобладание фенотипа Ссее у людей со слабым антигеном D. Выявлены достоверные различия по частоте типов этого антигена.
Вывод. Применение молекулярно-генетического типирования позволило определить типы слабого антигена D и точно установить резус-принадлежность обследуемых.